Un marco modular de aclaramiento de tejidos integrado con microscopía de campo de luz permite la fenotipificación...

Área de la Ciencia:

• Ingeniería Biomédica
• Biología Celular
• Microscopía

Sus antecedentes:

• Los métodos existentes de aclaramiento de tejidos carecen de flexibilidad para diversas muestras biológicas.
• La optimización de protocolos para la diversidad bioquímica es crucial para la imagenología volumétrica.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un marco modular para ensamblar tuberías de aclaramiento e imagenología adaptables.
• Adaptar protocolos para preguntas biológicas y tipos de muestras específicos.

Principales métodos:

• Se introdujo un marco modular orientado a preguntas para ensamblar tuberías de aclaramiento e imagenología.
• Se optimizaron sistemáticamente los módulos para la fluorescencia, antigenicidad, integridad tisular, transparencia y retención de proteínas.
• Se integró el marco con microscopía de campo de luz (LFM) para una adquisición y reconstrucción eficiente de datos.

Principales resultados:

• Se demostró la utilidad del marco en diversas aplicaciones cardíacas: desarrollo, infarto, regeneración, mapeo inmune y vascular.
• Se demostró que diferentes preguntas biológicas requieren distintos ensamblajes de módulos y parámetros.
• Se logró alta transparencia y retención de proteínas, preservando la fluorescencia endógena y la antigenicidad.

Conclusiones:

• El marco modular proporciona una base racional y práctica para análisis 3D adaptables.
• La integración con LFM permite el análisis volumétrico cuantitativo de alto rendimiento con tamaños de conjunto de datos reducidos.
• Este enfoque apoya análisis 3D interoperables de sistemas regenerativos, patológicos y comparativos en modelos de vertebrados.