Mejora de la detección del virus de la lengua azul equina: comparación y adaptación de ensayos de PCR

Área de la Ciencia:

• Virología Veterinaria; Diagnóstico Molecular; Vigilancia de Enfermedades

Sus antecedentes:

• La lengua azul equina (AHS) es una amenaza importante para la industria equina, con el virus (AHSV) endémico en África subsahariana. El diagnóstico preciso del AHSV es crucial para el control de enfermedades y el comercio internacional, siendo la RT-qPCR una herramienta diagnóstica clave. La variabilidad genética del AHSV puede afectar la precisión de los ensayos de RT-qPCR actuales, lo que podría provocar falsos negativos.

Objetivo del estudio:

• Evaluar la precisión diagnóstica de los ensayos de RT-qPCR recomendados por la OMSA para la detección del AHSV. Identificar posibles fallos en los ensayos existentes debido a la variabilidad genética del AHSV. Desarrollar y validar ensayos de RT-qPCR modificados con mayor sensibilidad y precisión para la detección del AHSV.

Principales métodos:

• Análisis in vitro de 150 muestras positivas de AHSV utilizando los ensayos de RT-qPCR de Agüero et al. y Guthrie et al. Análisis in silico de genes VP7 del AHSV de muestras falsas negativas y secuencias archivadas públicamente. Modificación de cebadores y sondas en los ensayos de Guthrie y Agüero basada en hallazgos in silico. Segundo análisis in vitro para evaluar la precisión diagnóstica de los ensayos modificados.

Principales resultados:

• El ensayo original de Agüero mostró una tasa de falsos negativos del 8,7%, sin detectar el AHSV en 13 muestras. El análisis in silico identificó variaciones genéticas que influyen en la unión de los cebadores/sondas. Los ensayos modificados de Agüero y Guthrie demostraron una sensibilidad del 100% en el segundo análisis in vitro. Los resultados in silico y in vitro destacaron la necesidad de una monitorización continua de la eficacia de la RT-qPCR.

Conclusiones:

• Los ensayos de RT-qPCR recomendados por la OMSA para el AHSV pueden tener limitaciones en la precisión diagnóstica debido a la variabilidad genética viral. Las modificaciones de los cebadores y las sondas pueden mejorar significativamente la sensibilidad de los ensayos de RT-qPCR para la detección del AHSV. La monitorización y actualización continua de los protocolos de diagnóstico molecular son esenciales para la vigilancia y el control precisos del AHSV.