SETDB1/ATF7IP regulan la ingeniería genómica precisa de genes regulados por HUSH

Área de la Ciencia:

• Genética
• Biología Molecular
• Epigenética

Sus antecedentes:

• Las nucleasas programables como CRISPR/Cas9 permiten la edición genómica precisa (PGE) a través de roturas de ADN de doble cadena (DSBs) y reparación dirigida por homología (HDR).
• Métodos alternativos utilizan variantes de nicasa para inducir roturas de ADN de cadena simple, facilitando la PGE a través de vías como el anillamiento de cadena dependiente de síntesis (SDSA) y la incorporación de ADN de cadena simple (ssDI).
• Si bien SDSA se comprende, el mecanismo de ssDI sigue sin estar claro, lo que impulsa la investigación de sus factores reguladores.

Objetivo del estudio:

• Elucidar los factores genéticos que regulan la vía ssDI en la edición genómica precisa.
• Identificar genes cuya ausencia mejora la eficiencia de ssDI.
• Comprender el papel de los modificadores de cromatina en la regulación de ssDI.

Principales métodos:

• Se realizó una selección de eliminación de CRISPR en todo el genoma en células humanas para identificar modificadores genéticos de ssDI.
• Se utilizaron reporteros transgénicos y genes de copia única (regulados por HUSH y no regulados por HUSH) para evaluar la eficiencia de ssDI.
• Se investigó la función de los reguladores identificados (SETDB1/ATF7IP y complejo HUSH) en ssDI.

Principales resultados:

• La selección identificó el heterodímero SETDB1:ATF7IP y el complejo HUSH como reguladores negativos significativos de ssDI.
• SETDB1/ATF7IP y HUSH inhibieron específicamente ssDI en reporteros transgénicos y genes de copia única regulados por HUSH.
• Esta regulación negativa no se observó en otros loci endógenos de copia única, lo que sugiere efectos específicos del locus.

Conclusiones:

• Los modificadores de cromatina, específicamente SETDB1/ATF7IP y el complejo HUSH, desempeñan un papel crítico en la regulación de la sub-vía ssDI de HDR.
• La estructura de la cromatina puede actuar como una barrera para la recombinación genética, influyendo en los resultados de la PGE.
• Estos hallazgos respaldan estrategias que involucran la modulación de la cromatina para mejorar la eficiencia de la PGE en loci endógenos de copia única.