Preparación rápida de muestras microfluídicas para el análisis de proteínas BRAF de tipo salvaje y mutante por...

Área de la Ciencia:

• Biotecnología
• Química Analítica
• Oncología

Sus antecedentes:

• La mutación BRAF V600E es un biomarcador clave en el diagnóstico y pronóstico del cáncer colorrectal.
• Los métodos actuales de detección basados en espectrometría de masas (EM) requieren una preparación de muestras extensa (aproximadamente 12 horas), lo que dificulta su uso clínico.
• Los métodos existentes consumen mucho tiempo y mano de obra, lo que limita su aplicación generalizada.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un método de preparación de muestras automatizado y rápido para la detección cuantitativa de BRAF V600E mediante EM.
• Integrar la inmunoprecipitación, el lavado y la digestión en la perla en una única plataforma microfluídica.
• Mejorar la eficiencia y reducir el tiempo de respuesta de la preparación de muestras de inmuno-EM.

Principales métodos:

• Se diseñó un chip microfluídico automatizado con micro Mezcladores, microválvulas y perlas guiadas magnéticamente integrados.
• El chip realiza inmunoprecipitación, lavados de múltiples pasos y digestión tripsínica en la perla en un flujo de trabajo continuo.
• Se utilizó la digestión en la perla para omitir los pasos de intercambio de tampones y mejorar la recuperación de péptidos.

Principales resultados:

• El sistema microfluídico integró con éxito todos los pasos de preparación de la muestra, logrando una automatización de extremo a extremo.
• La digestión en la perla arrojó más péptidos de BRAF en comparación con los métodos convencionales debido a una mayor recuperación de proteínas.
• El proceso automatizado redujo el tiempo de preparación de la muestra a aproximadamente 2.5-3 horas a partir de lisado celular clarificado.

Conclusiones:

• La plataforma microfluídica desarrollada ofrece una solución práctica y automatizada para la preparación de muestras de inmuno-EM.
• Esta tecnología acorta significativamente el tiempo de respuesta, mejorando la aplicabilidad clínica del análisis de proteínas mutantes basado en EM.
• El sistema proporciona simplicidad operativa y resultados rápidos, apoyando la medicina traslacional y de precisión.