Flujo de trabajo de metabolómica no dirigida basada en RPLC y HILIC para micromuestras de sangre

Área de la Ciencia:

• Química Analítica
• Bioquímica
• Metabolómica

Sus antecedentes:

• La microtoma de sangre (BμS) es una técnica mínimamente invasiva para analizar metabolitos endógenos.
• Las manchas de sangre secas (DBS) y la microtoma de absorción volumétrica (VAMS) son formatos clave de BμS.
• BμS es adecuada para la metabolómica, ofreciendo una alternativa al muestreo tradicional de sangre y plasma.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y optimizar un protocolo de extracción para BμS para metabolómica no dirigida.
• Establecer métodos robustos de cromatografía líquida/espectrometría de masas (RPLC-MS) y cromatografía de interacción hidrofílica/espectrometría de masas (HILIC-MS).
• Mejorar la cobertura de metabolitos tanto para compuestos de polares medios a no polares como para polares.

Principales métodos:

• Se desarrollaron y optimizaron dos nuevos métodos HILIC-MS/MS para metabolitos polares.
• Se utilizó un método RPLC-MS interno para metabolitos de polares medios a no polares.
• Se investigaron cinco procedimientos de extracción y se optimizó el flujo de trabajo para DBS y VAMS.

Principales resultados:

• Se desarrolló con éxito un método HILIC-MS de 15 minutos con reequilibrio de columna.
• Una mezcla de 20 % H2O/80 % MeOH (v/v) con reafirmación de muestra demostró ser eficaz para la extracción de metabolitos.
• La metodología detectó con éxito metabolitos en diversas vías, incluidos aminoácidos, acilcarnitinas y ácidos biliares.

Conclusiones:

• La metodología de extracción y LC-MS desarrollada proporciona un perfil completo de metabolitos a partir de BμS.
• Este enfoque mejora la cobertura de metabolitos y es aplicable tanto a DBS como a VAMS.
• El protocolo optimizado facilita el análisis de metabolómica no dirigida utilizando muestras de sangre mínimamente invasivas.