Desarrollo de un nuevo ensayo multi-locus basado en Flow-FISH para la detección de lesiones precancerosas cervicales...

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Oncología Oncología.
• Biotecnología La biotecnología es la biotecnología.

Sus antecedentes:

• La activación aberrante de STAT3 y las transcripciones persistentes de HPV16 E6E7 impulsan la progresión del cáncer de cuello uterino.
• La detección precisa de estos biomarcadores a nivel de una sola célula es crucial para comprender los mecanismos de la enfermedad y desarrollar terapias dirigidas.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y optimizar un ensayo Flow-FISH para la detección simultánea en una sola célula de las transcripciones STAT3 y HPV16 E6E7.
• Evaluar la especificidad, sensibilidad y utilidad del ensayo en líneas celulares de cáncer cervical y muestras de pacientes.

Principales métodos:

• Diseño y rediseño de las sondas STAT3 y HPV16 E6E7 utilizando el Stellaris Probe Designer.
• Microscopía de fluorescencia para la validación inicial de la sonda.
• Citometría de flujo para el análisis cuantitativo de la expresión de transcripción en líneas celulares y muestras de pacientes.
• Alineación de secuencia extensa para la evaluación de la especificidad de la sonda.

Principales resultados:

• Las sondas optimizadas demostraron una detección específica y robusta de las transcripciones STAT3 y HPV16 E6E7.
• El ensayo Flow-FISH cuantificó con éxito las transcripciones en varias líneas celulares de cáncer de cuello uterino y muestras derivadas de pacientes.
• Aumento de las fracciones celulares dual-positivas correlacionadas con la progresión de la enfermedad (LSIL a SCC) y la co-activación de STAT3.

Conclusiones:

• El ensayo optimizado Flow-FISH es un método sensible, específico y de alto rendimiento para el diagnóstico simultáneo a nivel de transcripción en el cáncer de cuello uterino.
• Este ensayo tiene una utilidad potencial en la estratificación de las lesiones cervicales y el seguimiento de la progresión de la enfermedad.