Identificación de sitios metilados diferencialmente para el NIPT basado en qPCR sensible a la metilación de las...

Área de la Ciencia:

• Genética La genética.
• Biología Molecular Biología Molecular
• Diagnóstico prenatal y diagnóstico prenatal.

Sus antecedentes:

• Las trisomías 13 y 18 son trastornos cromosómicos graves asociados con una alta mortalidad neonatal.
• La prueba prenatal no invasiva (NIPT) basada en la secuenciación de próxima generación (NGS) detecta con precisión estas aneuploidias, pero es costosa.
• Se está explorando la PCR cuantitativa sensible a la metilación (MS-qPCR) como una alternativa rentable al NIPT.

Objetivo del estudio:

• Investigar la MS-qPCR como un método viable y económico para la detección de las trisomías 13 y 18.
• Para validar los sitios metilados diferencialmente (DMS) para la detección de la trisomía.
• Optimizar la MS-qPCR para una alta eficiencia y reproducibilidad en el diagnóstico prenatal.

Principales métodos:

• Selección y validación de DMS utilizando enzimas de restricción sensibles a la metilación.
• Optimización de los primers dirigidos a los cromosomas 13 y 18.
• Pruebas de ADN de muestras de vellosidad coriónica (CVS) y sangre periférica (PBL).

Principales resultados:

• Veintidós de los 50 objetivos de DMS se validaron con éxito con relaciones significativas de trisomía / disomía.
• Se lograron eficiencias óptimas de amplificación (1.85-2.10) y alta especificidad/reproducibilidad del primer.
• Se identificaron enzimas de restricción sensibles a la metilación con altas proporciones de trisomía / disomía para DMS seleccionados.

Conclusiones:

• MS-qPCR es un enfoque NIPT prometedor, escalable y rentable para las trisomías 13 y 18.
• Se recomienda una validación adicional utilizando ADN libre de células (cfDNA) en el plasma materno.
• Se sugiere la expansión de las pruebas a diversas poblaciones para una mayor aplicabilidad.