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Gene Families

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Proteins: From Genes to Degradation

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Within a biological system, the DNA encodes the RNA, and the nucleotide sequence in the RNA further defines the amino acid sequence in the protein. This is referred to as “The Central Dogma of Molecular Biology” - a term coined by Francis Crick.  Central dogma is a firm principle in biology that defines the flow of genetic information within any life form. The two fundamental steps in central dogma are - transcription and translation.
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DNA-only Transposons

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DNA-only transposons are called autonomous transposons since they code for the enzyme transposase that is required for the transposition mechanism. Insertion of transposons can alter gene functions in multiple ways. They can mutate the gene, alter gene expression by introducing a novel promoter or insulator sequence, introduce new splice sites, and change the mRNA transcripts produced, or remodel chromatin structure.
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    Resumen

    Este estudio desarrolló un ensayo de qPCR para evaluar la calidad del ADN plasmático mediante la medición de la fragmentación del ADN. La proporción de amplicones pequeños a grandes indica efectivamente la fragmentación del ADN, crucial para una investigación precisa de los biomarcadores del cáncer.

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    Área de la Ciencia:

    • Biología Molecular Biología Molecular
    • La bioquímica es la bioquímica.
    • Genética La genética.

    Sus antecedentes:

    • La mejora de la purificación del ADN libre circulante (cfDNA) es vital para una evaluación precisa del ADN plasmático.
    • La contaminación del ADN de leucocitos puede sesgar los resultados en la investigación de biomarcadores de cáncer.
    • El análisis cuantitativo de los genes de limpieza puede servir como un indicador de calidad para cfDNA.

    Objetivo del estudio:

    • Desarrollar y evaluar ensayos cuantitativos de PCR (qPCR) para evaluar la calidad del ADN plasmático.
    • Para utilizar los genes de limpieza (LINE-1 y TOP1) como indicadores de la fragmentación y la contaminación del ADN.
    • Optimizar los métodos de purificación del cfDNA para la investigación de biomarcadores del cáncer.

    Principales métodos:

    • Seleccionado LINE-1 (L1) y TOP1 genes para el análisis.
    • Pares de imprimación diseñados para amplificar fragmentos de ADN cortos y largos.
    • Se utilizó la PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR) para determinar el número de copias del amplicón y calcular la proporción de amplicón pequeño a grande (S/L).
    • Se evaluó el impacto del tiempo y la temperatura de almacenamiento en la extracción de cfDNA de tubos K2EDTA.

    Principales resultados:

    • La relación S/L se correlacionó con los niveles de fragmentación del ADN, con TOP1 mostrando una mayor sensibilidad.
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    Conclusiones:

    • Se desarrollaron ensayos de qPCR para cuantificar la fragmentación del ADN plasmático utilizando genes de referencia de copia única y múltiple.
    • La relación S/L del número de copias del amplicón es una medida efectiva del estado de fragmentación del ADN.
    • Este ensayo sirve como una herramienta valiosa para evaluar la calidad del ADN plasmático en entornos de investigación.