Ingeniería genética de Staphylococcus haemolyticus: Superación de barreras de restricción-modificación y dirigirse a...

Área de la Ciencia:

• Microbiología
• Genómica
• Biología Molecular

Sus antecedentes:

• Staphylococcus haemolyticus es un patógeno nosocomial multidrogorresistente.
• Los complejos sistemas de restricción-modificación (RM) dificultan la manipulación genética, lo que limita los estudios sobre su patogénesis y evasión inmunitaria.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un conjunto de herramientas moleculares para la ingeniería genómica precisa de aislados clínicos de S. haemolyticus.
• Superar las barreras RM y permitir estudios funcionales de virulencia y adaptación del huésped.

Principales métodos:

• Se definieron genomas y metilomas de nueve aislados utilizando secuenciación PacBio SMRT y secuenciación de bisulfito.
• Se implementó una estrategia dual utilizando SyngenicDNA y una cepa de E. coli modificada (JMC4) para eludir los sistemas RM.
• Se permitió la eliminación dirigida de genes de virulencia (sraP, secA2, capA, capI) y el intercambio alélico del operón de la cápsula.

Principales resultados:

• Se diseñó con éxito un conjunto de herramientas moleculares para la modificación genómica precisa en S. haemolyticus.
• Se identificaron los sistemas RM de tipo II y tipo III sobrerrepresentados en aislados clínicos, lo que sugiere un papel en la adaptación.
• Se mejoró la eficiencia de transformación y se permitió la eliminación dirigida de genes y modificaciones cromosómicas a gran escala.

Conclusiones:

• Este estudio establece las primeras herramientas moleculares robustas para la transformación y edición del genoma en S. haemolyticus.
• Las herramientas desarrolladas sientan las bases para futuros estudios funcionales de virulencia y adaptación del huésped en este patógeno.
• Los enfoques tienen una utilidad más amplia para la ingeniería de otras bacterias con barreras RM.