Desarrollo de un proceso de fabricación práctico y conforme a las GMP para células madre pluripotentes inducidas...

Área de la Ciencia:

• Biología de Células Madre
• Reprogramación Celular
• Buenas Prácticas de Fabricación (GMP)

Sus antecedentes:

• Las células madre pluripotentes inducidas autólogas (iPSC) son prometedoras para la medicina regenerativa.
• El establecimiento de flujos de trabajo de fabricación conformes a las GMP es crucial para la traslación clínica.
• La reprogramación de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) ofrece una fuente viable para la generación de iPSC.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar un flujo de trabajo de fabricación conforme a las GMP para la generación de iPSC autólogas a partir de células T.
• Evaluar la calidad, identidad e integridad genómica de las iPSC generadas.
• Optimizar el flujo de trabajo para mejorar la eficiencia y reproducibilidad en entornos clínicos.

Principales métodos:

• Reprogramación de PBMC enriquecidas en células T utilizando vectores de virus Sendai de grado GMP.
• Caracterización de colonias de iPSC para marcadores de pluripotencia (Oct-4, TRA-1-60, SSEA-1).
• Confirmación del origen de células T mediante análisis de reorganización del gen de la cadena β del receptor de células T (TCR).
• Análisis citogenético (cariotipado G-banda) y secuenciación dirigida (ensayo OncoPanel) para la integridad genómica.
• Implementación de pausas de proceso para la optimización del flujo de trabajo.

Principales resultados:

• Generación de 20 colonias de iPSC con alta expresión de marcadores de pluripotencia.
• Confirmación del origen de células T en 18/20 líneas de iPSC, con 14 líneas únicas y clonalmente distintas.
• Identificación de una deleción recurrente del gen PRSS1 en iPSC derivadas de células T, también presente en las células T donantes.
• Obtención de 13 líneas únicas de iPSC derivadas de células T que cumplen todos los criterios de control de calidad y liberación.
• Demostración de estrategias de optimización del flujo de trabajo para mejorar la eficiencia operativa.

Conclusiones:

• Se estableció con éxito un flujo de trabajo práctico y conforme a las GMP para la generación de iPSC autólogas derivadas de células T.
• Las líneas de iPSC generadas son adecuadas para aplicaciones clínicas y traslacionales posteriores.
• La optimización del flujo de trabajo mejora la viabilidad y reproducibilidad de la fabricación de iPSC en entornos clínicos.