Control óptico de la actividad Cas9 mediante crRNAs escindibles por luz visible

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular
• Biotecnología
• Biología Sintética

Sus antecedentes:

• La tecnología CRISPR-Cas9 ofrece una edición genómica precisa, pero carece de actividad controlable.
• Los métodos actuales para regular la actividad de Cas9 pueden ser invasivos o carecer de control espaciotemporal.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un sistema novedoso para el control inducible por luz de la actividad Cas9.
• Permitir la regulación espaciotemporal no invasiva y precisa de la edición del genoma para mejorar la seguridad.

Principales métodos:

• Diseño y síntesis de moléculas de ARN CRISPR (crRNA) que incorporan enlazadores fotocindibles (PL).
• Prueba de la escisión de crRNA y la inhibición de Cas9 utilizando un ensayo in vitro de Cas9.
• Demostración del control mediado por luz visible sobre la actividad de Cas9.

Principales resultados:

• Se sintetizaron e incorporaron con éxito crRNAs escindibles por luz visible con enlazadores fotocindibles.
• La escisión de crRNAs por luz visible inhibió eficientemente la actividad nucleasa de Cas9.
• Un ensayo in vitro confirmó la regulación a la baja dependiente de la luz de Cas9.

Conclusiones:

• Los crRNAs escindibles por luz visible proporcionan un mecanismo novedoso para regular la actividad de Cas9.
• Este enfoque permite un control preciso, no invasivo e inofensivo sobre la edición del genoma.
• El sistema desarrollado es prometedor para aplicaciones CRISPR-Cas9 más seguras y específicas.