Métodos de edición del genoma viral y aplicaciones en la era CRISPR

Área de la Ciencia:

• Virología
• Biología Molecular
• Genética

Sus antecedentes:

• Los sistemas CRISPR-Cas revolucionan la manipulación genética de virus de ADN grandes.
• Los métodos tradicionales como la recombinación BAC tienen limitaciones.

Objetivo del estudio:

• Proporcionar un marco práctico para aplicar la tecnología CRISPR a los herpesvirus y otros virus de ADN grandes.
• Servir como una alternativa y complemento a la recombinación BAC tradicional.

Principales métodos:

• Selección de nucleasas y diseño de sgRNA para una edición eficiente.
• Optimización de la configuración de la plantilla donante y la longitud del brazo de homología.
• Entrega sincronizada de complejos Cas y ADN donante, junto con estrategias de mejora de HDR.

Principales resultados:

• Demostró knock-ins reproducibles y sin cicatrices y manipulación génica condicional en el virus del herpes simple tipo 1 y el citomegalovirus humano.
• Logró la edición directa de aislados clínicos previamente inaccesibles con métodos BAC.

Conclusiones:

• La tecnología CRISPR proporciona una plataforma flexible y escalable para la genómica funcional viral.
• Permite avances en el descubrimiento de objetivos antivirales y la virología traslacional.