Flujo de trabajo guiado por cryo-CLEM para la evaluación y optimización cuantitativa de la calidad de especímenes de...

Área de la Ciencia:

• Imagenología Celular y Molecular; Biología Estructural; Técnicas de Microscopía

Sus antecedentes:

• La microscopía criogénica correlativa de luz y electrones (cryo-CLEM) es crucial para la orientación en la criotomografía electrónica (cryo-ET).; El rendimiento de imagen de los sistemas cryo-CLEM en condiciones criogénicas no está bien caracterizado, lo que limita su potencial.; La optimización de la calidad del espécimen es fundamental para la adquisición exitosa de datos de cryo-ET.

Objetivo del estudio:

• Evaluar y comparar las capacidades de imagen de dos sistemas cryo-CLEM comerciales.; Cuantificar la resolución espacial y la relación señal-ruido (SNR) de los sistemas cryo-CLEM.; Establecer cryo-CLEM como una herramienta para evaluar la calidad del espécimen para cryo-ET.

Principales métodos:

• Evaluación cuantitativa de dos sistemas cryo-CLEM: Leica EM cryo-CLEM y Thermo Fisher Scientific iFLM.; Evaluación utilizando especímenes celulares vitrificados que expresan proteínas marcadas con GFP.; Medición de la resolución espacial y la relación señal-ruido (SNR).

Principales resultados:

• El sistema Leica EM cryo-CLEM ofreció una mayor SNR y una adquisición más rápida a través de imágenes de mosaico.; El iFLM de Thermo Fisher Scientific proporcionó un campo de visión más amplio, demostrando fortalezas complementarias.; Se estableció una correlación cuantitativa entre la intensidad de la fluorescencia y el grosor de la lamela.

Conclusiones:

• Los sistemas cryo-CLEM poseen fortalezas complementarias para la preparación de especímenes de cryo-ET.; La imagen cryo-CLEM proporciona retroalimentación cuantitativa sobre el grosor y la calidad de la lamela.; Esta retroalimentación agiliza el flujo de trabajo de cryo-ET al permitir la optimización temprana de la calidad del espécimen.