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Updated: Jul 11, 2026
11:09
An HS-MRM Assay for the Quantification of Host-cell Proteins in Protein Biopharmaceuticals by Liquid Chromatography Ion Mobility QTOF Mass Spectrometry
Published on: April 17, 2018
10.7K
Un método bioanalítico simple y de alta sensibilidad LC-MS/MS para oligonucleótidos de fosforodiamidato morfolino en
Tsubasa Kameyama1, Shunji Imai1, Rei Mitamura1
1Drug Metabolism and Pharmacokinetics Research Department, Discovery Research Laboratories, Nippon Shinyaku Co., Ltd, Kyoto, Japan.
Bioanalysis
|February 19, 2026
Resumen
Un nuevo método bioanalítico mejora la cuantificación de oligómeros de morfolino de fosforodiamidato. Este enfoque mejora la sensibilidad y la recuperación para viltolarsen y compuestos similares en plasma.
Área de la Ciencia:
- Química Analítica
- Bioquímica
- Farmacología
Sus antecedentes:
- La cuantificación de oligómeros de morfolino de fosforodiamidato mediante LC-MS/MS presenta desafíos debido a la baja sensibilidad.
- Los métodos convencionales de extracción en fase sólida muestran bajas tasas de recuperación para estos oligómeros específicos.
- Existe la necesidad de un método bioanalítico más sensible con pretratamiento optimizado para la determinación precisa de oligómeros.
Objetivo del estudio:
- Desarrollar y validar un método bioanalítico de alta sensibilidad para cuantificar oligómeros de morfolino de fosforodiamidato en plasma.
- Mejorar las técnicas de pretratamiento existentes para una mayor recuperación y sensibilidad.
- Establecer un método robusto aplicable a varios oligómeros de morfolino de fosforodiamidato.
Principales métodos:
- Se utilizó precipitación de proteínas (PPT) con metanol para el pretratamiento de muestras, logrando altas recuperaciones (>90 %) para viltolarsen.
- Se empleó cromatografía líquida de fase reversa (RPLC) con elución en gradiente para minimizar la supresión iónica.
- Se combinó PPT y RPLC para un análisis LC-MS/MS optimizado.
Principales resultados:
- Se logró un límite de cuantificación inferior de 1 ng/mL para viltolarsen, una sensibilidad significativamente mayor que los oligómeros aprobados (10-20 ng/mL).
- Se demostró una excelente precisión entre corridas (97,1 %–109 %) y precisión (2,56 %–10,5 %).
- Se aplicó con éxito el método a otro oligómero de morfolino de fosforodiamidato, ψM23D (+07-18).
Conclusiones:
- Se estableció un método bioanalítico simple y de alta sensibilidad para la determinación de viltolarsen mediante la optimización de RPLC y PPT.
- Se validó la aplicabilidad del método a oligómeros de morfolino de fosforodiamidato con diferentes secuencias.
- El método desarrollado ofrece una mayor sensibilidad y recuperación para la cuantificación de oligómeros.
