Desarrollo y validación de un método robusto de UPLC-MS/MS para el análisis de poliaminas en células, biofluidos y...

Área de la Ciencia:

• Bioquímica
• Neurociencia
• Química Analítica

Sus antecedentes:

• La pérdida de función de la proteína ATP13A2 se relaciona con la enfermedad de Parkinson (EP) y la neurodegeneración.
• Las disfunciones lisosomales y mitocondriales son clave en la EP de inicio temprano.
• Las poliaminas desempeñan funciones críticas en procesos celulares relevantes para la patogénesis de la EP.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar un método de cromatografía líquida de ultra alto rendimiento acoplada a espectrometría de masas en tándem (UPLC-MS/MS).
• Cuantificar poliaminas endógenas en diversas matrices biológicas.
• Apoyar la investigación sobre la enfermedad de Parkinson y trastornos neurodegenerativos relacionados.

Principales métodos:

• Preparación de muestras que implica precipitación de proteínas y benzoilación.
• Separación por cromatografía líquida en una columna ACQUITY BEH C18.
• Detección por espectrometría de masas en tándem utilizando el modo de monitorización de reacciones seleccionadas (SRM).

Principales resultados:

• Se desarrolló un método UPLC-MS/MS validado para la cuantificación de 10 poliaminas endógenas.
• Se logró un bajo límite de cuantificación (LLOQ) y un alto límite de cuantificación superior (ULOQ).
• Se demostró la aplicabilidad del método en lisados celulares, plasma de ratón, líquido cefalorraquídeo y tejidos cerebrales.

Conclusiones:

• El método UPLC-MS/MS desarrollado es robusto y adecuado para la cuantificación de poliaminas en la investigación de la EP.
• Esta herramienta analítica facilita la investigación de la desregulación de poliaminas en enfermedades neurodegenerativas.
• El método proporciona un medio fiable para estudiar los efectos posteriores de la pérdida de función de ATP13A2.