Optimización de protocolos para el perfilado de microARN de heces de bebés y niños pequeños

Área de la Ciencia:

• La bioquímica es la bioquímica.
• Biología Molecular Biología Molecular
• Investigación en Pediatría.

Sus antecedentes:

• El perfil del microARN (miRNA) en las heces de bebés y niños pequeños está ganando interés.
• Ningún estudio previo ha comparado protocolos para preservar y extraer miRNAs de este tipo específico de muestra.

Objetivo del estudio:

• Para comparar la eficacia de diferentes kits comerciales y métodos de conservación para la extracción de ARN de heces infantiles.
• Determinar el protocolo óptimo para el perfil de ARN de alta calidad y el perfil de miARN confiable en niños pequeños.

Principales métodos:

• Evaluó tres kits comerciales de extracción de ARN y cuatro métodos de preservación utilizando heces de niños menores de dos años.
• Evaluación de la calidad del ARN utilizando el Número de Calidad del ARN (RQN).
• Se realizó la secuenciación de miRNA (miRNA-seq) para comparar los perfiles de miRNA de los métodos de conservación de mejor rendimiento.

Principales resultados:

• El kit de Zymo BIOMICs obtuvo el número de calidad de ARN (RQN) más alto.
• RNAlater y los tubos de recolección fecal de escudo de ADN / ARN de Zymo proporcionaron los RQN más altos y no diferían significativamente.
• La secuenciación de miRNA no reveló diferencias significativas en los perfiles de miRNA humano entre los métodos de preservación de RNAlater y Zymo Shield.

Conclusiones:

• La recolección de heces de bebés / niños pequeños en tubos RNAlater o Zymo DNA / RNA Shield, combinado con el kit de extracción Zymo BIOMICs, produce ARN de alta calidad.
• Estos métodos dan como resultado perfiles de miRNA humanos comparables, lo que los hace adecuados para estudios de miRNA en bebés.