Ampliación de la capacidad de multiplexación de las sondas HIDE mediante microscopía de imagen de fluorescencia de...

Área de la Ciencia:

• Biofotónica
• Imagen celular
• Biología molecular

Sus antecedentes:

• La microscopía de imagen de fluorescencia (FLIM) ofrece ventajas únicas para el análisis celular debido a la independencia de la vida útil de la fluorescencia de los perfiles de excitación/emisión.
• La distinción de fluoróforos espectralmente similares y la modulación de la vida útil de la fluorescencia para aplicaciones como la multiplexación FLIM son áreas clave de interés.
• Los métodos actuales a menudo requieren protocolos de transfección complejos, lo que limita las aplicaciones en células vivas.

Objetivo del estudio:

• Presentar protocolos completos para la multiplexación FLIM sin transfección en células de mamíferos vivas.
• Permitir la obtención de imágenes simultáneas de múltiples fluoróforos espectralmente similares utilizando distintas vidas útiles de fluorescencia.
• Proporcionar un marco para la selección de sondas, la preparación celular y el análisis de datos FLIM.

Principales métodos:

• Desarrollo y optimización de ensayos de cribado in vitro para asas bioortogonales y tintes.
• Protocolos para la incubación de células de mamíferos vivas con sondas de moléculas pequeñas para la multiplexación FLIM.
• Directrices detalladas para la configuración de experimentos FLIM y la adquisición de datos de vida útil.

Principales resultados:

• Demostración exitosa de la multiplexación FLIM sin transfección en células vivas.
• Establecimiento de protocolos para la selección eficiente de sondas y la incubación celular.
• Validación de métodos para analizar datos FLIM y extraer información significativa sobre la vida útil.

Conclusiones:

• La multiplexación FLIM sin transfección es una técnica viable y potente para la obtención de imágenes avanzadas de células vivas.
• Los protocolos proporcionados facilitan la implementación práctica de la multiplexación FLIM en la investigación biológica.
• Este enfoque amplía las capacidades de FLIM para el análisis celular multiplexado sin manipulación genética.