El sistema CRISPR/Cas9 policistrónico basado en ARNt t aumenta la eficiencia de la deleción de múltiples genes en el...

Área de la Ciencia:

• Ciencias de las plantas Ciencias de las plantas.
• Biología Molecular Biología Molecular
• La edición del genoma.

Sus antecedentes:

• CRISPR/Cas9 es el estándar para el nocaut genético en Physcomitrium patens a través de pequeños indels.
• Los métodos existentes requieren la orientación de genes individuales, lo que limita la eficiencia de los estudios multigénicos.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un sistema eficiente de doble ARNg para grandes deleciones dirigidas de múltiples genes en Physcomitrium patens.
• Para comparar matrices policistrónicas de tRNA-gRNA con las construcciones convencionales de gRNA.
• Para permitir el nocaut simultáneo de múltiples genes para estudios funcionales.

Principales métodos:

• Comparó matrices policistrónicas de tRNA-gRNA contra construcciones individuales de gRNA impulsadas por promotores utilizando el gen MAD2.
• Se ha probado la eliminación simultánea de dos genes (katanina) y cuatro genes (TPX2) en un solo evento.
• Evaluación de la eficiencia de eliminación a través de diferentes pares de gRNA en la edición múltiple.

Principales resultados:

• Las construcciones policistrónicas duplicaron la frecuencia de eliminación de genes grandes en comparación con los diseños convencionales.
• Se logra la eliminación simultánea de dos o cuatro genes con una eficiencia de hasta un 42%.
• El diseño confirmado de gRNA impacta significativamente en la eficiencia de edición de múltiples.

Conclusiones:

• Estableció un marco rápido y eficiente para la eliminación simultánea de múltiples genes en Physcomitrella.
• Proporciona una alternativa práctica a la recombinación homóloga para la función génica y la investigación aplicada.
• Destaca la importancia del diseño del gRNA para la edición exitosa del genoma múltiple.