Elusión de anticuerpos inducida por detergente a un pH casi neutro en la cromatografía de membrana de la proteína A

Área de la Ciencia:

• Biotecnología La biotecnología es la biotecnología.
• Química de las proteínas química de las proteínas.
• Fabricación de productos biofarmacéuticos Fabricación de productos biofarmacéuticos

Sus antecedentes:

• La cromatografía de afinidad de proteína A es estándar para la purificación de anticuerpos monoclonales (mAb).
• La elución de bajo pH (pH 3-4) comúnmente utilizada puede afectar negativamente la estabilidad de mAb, lo que lleva a la agregación y la pérdida de actividad.
• El desarrollo de métodos de elución más suaves es crucial para preservar la integridad de mAb.

Objetivo del estudio:

• Para evaluar un ligando recombinante de la proteína A (rProtein A) en una plataforma de membrana para una elución de pH más alto.
• Investigar el uso de un detergente de inactivación del virus para aumentar aún más el pH de la elución.
• Para evaluar el impacto de la elución impulsada por excipientes en la recuperación y estabilidad de mAb.

Principales métodos:

• Utilizó un ligando de proteína A recombinante en una plataforma de cromatografía de membrana.
• Incorpora un detergente de óxido de amina de cadena de alquilo para la inactivación del virus y la modulación del pH.
• Comparación de la eficiencia de elución y la recuperación del producto a diferentes niveles de pH con y sin el detergente.
• Se evaluó la especificidad y el impacto del detergente en diferentes condiciones de elución y variantes del ligando de la proteína A.

Principales resultados:

• El ligando de la proteína A recombinante apoyó un pH de elución basal más alto (4-5).
• La adición del detergente aumentó el pH de elución a un rango casi neutro (5.5-6.5).
• La recuperación de mAb aumentó del 29,2% al 99,5% a un pH de 5,5 con el detergente.
• La recuperación se mantuvo alta (>90%) a pH 6, y fue significativa incluso cuando el detergente se eliminó antes de la elución.

Conclusiones:

• La elución impulsada por excipientes mejora significativamente la recuperación y estabilidad de mAb durante la cromatografía de proteína A.
• Las condiciones de elución casi neutra mitigan los riesgos de agregación y pérdida de actividad asociados con la elución de bajo pH.
• Este enfoque ofrece una estrategia de purificación más suave y potencial para la inactivación integrada del virus dentro de la captura de afinidad.