Video Experimental Relacionado
Updated: Feb 24, 2026
11:35
Selection-dependent and Independent Generation of CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockouts in Mammalian Cells
Published on: June 16, 2017
13.3K
El doble knockout secuencial de la glutamina sintetasa específica del cromosoma con Cas-CLOVER establece plataformas
Cintia Gomez Limia1, Valeriya Steffey1, Hsueh Che Cheng1
1Demeetra AgBio, Lexington, Kentucky, USA.
Biotechnology progress
|February 22, 2026
Resumen
La edición del genoma Cas-CLOVER creó eficientemente líneas celulares de ovario de hámster chino (CHO) de alto rendimiento para la producción biofarmacéutica. Esta plataforma robusta permite una selección estricta y una expresión estable de anticuerpos, lo que promueve el desarrollo de líneas celulares.
Área de la Ciencia:
- Biotecnología La biotecnología es la biotecnología.
- Biología Molecular Biología Molecular
- La genómica es la genómica.
Sus antecedentes:
- Las células K1 del ovario del hámster chino (CHO) son críticas para la producción biofarmacéutica.
- El desarrollo de líneas celulares de alto rendimiento requiere eficientes estrategias de edición del genoma.
- Las células CHO knockout de la glutamina sintetasa (GS) facilitan la selección de clones de alto rendimiento.
Objetivo del estudio:
- Evaluar la eficiencia de Cas-CLOVER en la ingeniería de células CHO-K1 adaptadas a la suspensión para la producción biofarmacéutica.
- Establecer una plataforma robusta y editada genéticamente para el desarrollo de líneas celulares (CLD).
- Para comparar Cas-CLOVER con Cas9 para la edición de GS loci.
Principales métodos:
- Cas-CLOVER y Cas9 se utilizaron para editar los loci GS5 y GS1 en las células CHO-K1.
- Se empleó el Sistema de Transfección NeonTM para la entrega.
- El diseño de ARN de doble guía se aprovechó para generar líneas de nocaut simples y dobles.
- Se utilizó el sistema de transposasa Harbor-IN para la expresión estable de trastuzumab.
Principales resultados:
- Cas-CLOVER demostró una mayor eficiencia de edición (84% en GS5, 74% en GS1) en comparación con Cas9.
- No se detectaron mutaciones fuera del objetivo en 40 sitios pronosticados para las líneas de nocaut de GS generadas.
- La plataforma CleanCut GS CHO produjo clones de alta producción con una productividad >100 pg/célula/día y títulos >5 g/L.
- La estabilidad del título de anticuerpo se mantuvo durante 60 generaciones.
Conclusiones:
- Cas-CLOVER es una herramienta de edición del genoma altamente eficiente y precisa para la ingeniería celular CHO.
- La plataforma CleanCut GS CHO desarrollada soporta una selección estricta y la generación de clones de alto rendimiento.
- Cas-CLOVER es una herramienta versátil para avanzar en el desarrollo de líneas celulares en la producción biofarmacéutica.
