Evaluación de los efectos de un flujo de trabajo de procesamiento de tejidos de patología 3D en análisis moleculares...

Área de la Ciencia:

• Imagen Biomédica; Patología; Biología Molecular

Sus antecedentes:

• La histopatología 2D estándar limita el muestreo de tejidos y el contexto morfológico.; La patología 3D no destructiva ofrece datos volumétricos y preservación de muestras para análisis futuros.; No se comprende bien el impacto de la patología 3D en las biomoléculas para ensayos posteriores.

Objetivo del estudio:

• Evaluar el efecto de un protocolo de patología 3D en la integridad del ADN, ARN y proteínas.; Evaluar la compatibilidad de los tejidos procesados ​​con patología 3D con los ensayos moleculares posteriores.; Determinar si la patología 3D se puede combinar con análisis moleculares.

Principales métodos:

• Se aplicó un protocolo de patología 3D (desparafinación, tinción, aclaramiento óptico, microscopía de hoja de luz) a especímenes de cáncer FFPE.; Se reincorporaron los tejidos y se compararon con controles no procesados.; Se realizaron extracción de ADN/ARN, evaluación de calidad, PCR, RT-qPCR, secuenciación Sanger, secuenciación de ARN e IHC.

Principales resultados:

• Se observó una ligera disminución en el rendimiento de ADN/ARN y un aumento de la fragmentación, pero la amplificabilidad se conservó en gran medida.; La secuenciación Sanger confirmó secuencias de ADN precisas y la secuenciación de ARN mostró perfiles transcriptómicos en gran medida sin cambios.; La tinción de inmunohistoquímica (IHC) para biomarcadores comunes arrojó resultados comparables, lo que indica una buena preservación de proteínas.

Conclusiones:

• El flujo de trabajo de patología 3D tiene un impacto mínimo en la integridad del ADN, ARN y proteínas.; La patología 3D es compatible con análisis moleculares posteriores, incluida la secuenciación y la IHC.; Este estudio demuestra la viabilidad de integrar la patología 3D con aplicaciones moleculares para un análisis integral del cáncer.