Diversidad morfológica de la activación y disfunción de linfocitos desvelada por imágenes multiplexadas de alto...

Área de la Ciencia:

• Inmunología
• Biología Celular
• Bioimagen

Sus antecedentes:

• Las tecnologías actuales de células únicas, como la transcriptómica y la proteómica, ofrecen información limitada sobre los fenotipos de las células inmunitarias influenciados por la organización espacial, la estructura de los orgánulos y el citoesqueleto.
• La comprensión de estas características celulares físicas es crucial para una visión integral de la función de las células inmunitarias.

Objetivo del estudio:

• Presentar TGlow, una plataforma de imágenes escalable de alto contenido diseñada para la fenotipificación sistemática de linfocitos humanos primarios a nivel de célula única.
• Permitir la cuantificación conjunta de la morfología celular, la organización de los orgánulos y los estados de activación inmune.

Principales métodos:

• TGlow integra la inmunofluorescencia cíclica y la microscopía confocal de pilas de z profundas.
• Utiliza canalizaciones de procesamiento de datos de código abierto con extracción de características clásicas y basadas en transformadores de visión auto-supervisados.
• Se analizaron más de 400.000 células T humanas primarias (CD4+ y CD8+).

Principales resultados:

• TGlow resolvió estados fenotípicos distintos y reproducibles en la activación de células T, perturbaciones farmacológicas, knockouts CRISPR y agotamiento de células T CD8+.
• Identificó fenotipos de fármacos específicos del mecanismo, incluida la polarización defectuosa del retículo endoplásmico.
• Reveló la agrupación mitocondrial vinculada a la activación y el ciclo celular, fenotipos específicos de genes de CRISPR y colapso del citoesqueleto en células T CD8+ agotadas.

Conclusiones:

• TGlow ofrece un marco escalable para la fenotipificación de alta dimensión de los estados de los linfocitos.
• Avanza en la genómica funcional, el cribado de perturbaciones y el perfilado inmunitario al vincular las perturbaciones genéticas/farmacológicas con la función celular.
• Resuelve la heterogeneidad morfológica y funcional en los linfocitos.