HAMMER: Ensayo de reportero de edición de ARNm mediado por APOBEC3A basado en horquillas

Área de la Ciencia:

• Bioquímica y Biología Molecular
• Genética y Genómica
• Virología e Investigación del Cáncer

Sus antecedentes:

• La enzima APOBEC3A cataliza la desaminación de citosina a uracilo en el ADN y el ARN.
• La actividad aberrante de APOBEC3A está relacionada con mutaciones impulsoras del cáncer y la inmunidad innata.
• El papel de la edición de ARNm mediada por APOBEC3A en la evolución de virus y cáncer requiere una mayor investigación.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un ensayo celular rápido basado en luminiscencia para cuantificar la actividad de edición de ARN de APOBEC3A.
• Establecer una herramienta para caracterizar inhibidores de APOBEC3A.
• Investigar el impacto de APOBEC3A en la actividad de la ribonucleótido reductasa de herpesvirus.

Principales métodos:

• Desarrollo del ensayo HAMMER (hairpin-based APOBEC3A-mediated mRNA editing reporter).
• Utilización de reporteros de luciferasa renilla y luciérnaga en tándem separados por una secuencia sustrato de APOBEC3A.
• Medición de la actividad de APOBEC3A a través de la relación de luminiscencia de luciferasa de luciérnaga a renilla.
• Prueba de la especificidad y la respuesta a la dosis de HAMMER con construcciones humanas de APOBEC3A y de herpesvirus.

Principales resultados:

• HAMMER informa con precisión la actividad de APOBEC3A como una reducción en la relación de luciferasa de luciérnaga a renilla.
• El ensayo es sensible a la dosis, depende de la actividad catalítica y es específico para la APOBEC3A humana.
• La inhibición de APOBEC3A condujo a una recuperación sensible a la dosis de la expresión de la luciferasa de luciérnaga.

Conclusiones:

• HAMMER es un método escalable y fácil de usar para cuantificar la edición de ARN de APOBEC3A celular.
• El ensayo facilita la caracterización de posibles inhibidores de APOBEC3A.
• HAMMER proporciona información sobre el papel de APOBEC3A en procesos biológicos y enfermedades.