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Updated: Feb 24, 2026
Determination of the Relative Potency of an Anti-TNF Monoclonal Antibody mAb by Neutralizing TNF Using an In Vitro Bioanalytical Method
Published on: September 16, 2017
Cuantificación absoluta de factor de necrosis tumoral alfa mediante espectrometría de masas con dilución isotópica
Chenchen Bao1, Jing Wang1, Wenqiang Xia2
1Zhejiang Provincial Key Laboratory of Biometrology and Inspection & Quarantine, College of Life Sciences, China Jiliang University, Hangzhou, China.
Este estudio presenta un nuevo método trazable a SI que utiliza espectrometría de masas en tándem con dilución isotópica y cromatografía líquida para cuantificar con precisión el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α). El ensayo desarrollado mejora la estandarización clínica y la fiabilidad de los biomarcadores para la detección de TNF-α.
Área de la Ciencia:
- Bioquímica
- Química Analítica
- Descubrimiento de Biomarcadores
Sus antecedentes:
- El factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α) es un mediador inflamatorio clave.
- El TNF-α sirve como biomarcador diagnóstico de enfermedades autoinmunes e infecciosas.
- La cuantificación precisa de TNF-α es crucial para el diagnóstico clínico y la investigación.
Objetivo del estudio:
- Establecer un método de referencia trazable a SI para la cuantificación de TNF-α.
- Validar el método mediante análisis de aminoácidos y péptidos por LC-IDMS.
- Evaluar la utilidad del método en el desarrollo de kits de detección y la calibración de instrumentos.
Principales métodos:
- Desarrollo de un método de referencia trazable a SI mediante espectrometría de masas en tándem con dilución isotópica y cromatografía líquida (LC-IDMS).
- Cuantificación de TNF-α a través de la hidrólisis de aminoácidos y el análisis de péptidos específicos.
- Utilización de aminoácidos y péptidos marcados con isótopos estables como estándares internos.
Principales resultados:
- El método LC-IDMS desarrollado demostró una excelente linealidad (R² > 0,999) y repetibilidad (RSD < 3%).
- El análisis de aminoácidos arrojó una fracción másica de TNF-α de (0,770 ± 0,033) mg/g.
- El análisis de péptidos resultó en una concentración de TNF-α de 0,769 ± 0,046 mg/g, sin diferencia significativa con el análisis de aminoácidos.
Conclusiones:
- Se estableció con éxito un método preciso y trazable a SI para la cuantificación de TNF-α.
- El método es adecuado para el desarrollo de kits de detección y la calibración de instrumentos, mejorando la estandarización de los ensayos clínicos.
- Los datos de aplicación confirmaron la fiabilidad del método en ensayos de apoptosis celular y evaluación de kits, mejorando la fiabilidad de los biomarcadores.
