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Updated: May 6, 2026
11:10
Expression, Purification, and Antimicrobial Activity of S100A12
Published on: May 13, 2017
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Expresión heteróloga, purificación y caracterización funcional de la serratiopeptidasa recombinante de Serratia
Devtulya Chander1, Diksha Koul1, Shubham Singh2,3
1Fermentation and Microbial Biotechnology Division, CSIR-Indian Institute of Integrative Medicine, Canal Road, Jammu, 180001, India.
World journal of microbiology & biotechnology
|February 23, 2026
Resumen
La serratiopeptidasa recombinante producida en E. coli ofrece un agente antiinflamatorio seguro y eficaz. Este estudio optimizó su producción y purificación, demostrando una actividad comparable a las formas comerciales.
Área de la Ciencia:
- Biotecnología La biotecnología es la biotecnología.
- Ingeniería de enzimas Ingeniería de enzimas Ingeniería de enzimas
- Farmacología Farmacología.
Sus antecedentes:
- La serratiopeptidasa, una enzima terapéutica, se obtiene tradicionalmente de Serratia marcescens.
- La producción recombinante en Escherichia coli (E. coli) presenta una alternativa más segura debido a las preocupaciones de bioseguridad con la bacteria original.
Objetivo del estudio:
- Clonar y expresar heterológicamente un gen serratiopeptidasa termoactivo de S. marcescens AD-W2 en E. coli K12.
- Para optimizar las condiciones de expresión para la producción de serratiopeptidasa recombinante de alto rendimiento.
- Caracterizar la enzima recombinante purificada y evaluar su potencial antiinflamatorio.
Principales métodos:
- La clonación genética y la expresión heteróloga en E. coli K12 utilizando el plásmido pET28a.
- Optimización de parámetros de expresión que incluyen temperatura, densidad óptica, concentraciones de inductores (L-ramnosa, IPTG) y oxígeno disuelto.
- Purificación y repliegue en un solo paso utilizando filtración por flujo tangencial (TFF) y diafiltración.
- Pruebas de actividad enzimática, análisis cinético (Km) y pruebas antiinflamatorias in vitro en células RAW 264.7 estimuladas por LPS.
Principales resultados:
- Las condiciones optimizadas produjeron 190 mg/g (4747 mg/L) de serratiopeptidasa en 9 horas.
- La serratiopeptidasa recombinante purificada mostró una alta actividad específica (1800 U / mg) con una actividad óptima a pH 9.0 y 50 ° C.
- El análisis cinético arrojó un Km de 1,38 mg/mL para la caseína.
- La enzima recombinante exhibió efectos antiinflamatorios comparables a los de la serratiopeptidasa comercial al inhibir el óxido nítrico y la liberación de citoquinas proinflamatorias.
Conclusiones:
- La serratiopeptidasa recombinante puede producirse de manera eficiente en E. coli K12.
- La enzima purificada posee actividades proteolíticas y antiinflamatorias significativas.
- Esta enzima recombinante representa una alternativa segura, efectiva y prometedora para aplicaciones terapéuticas.
