Mediciones del índice de refracción trazable de líquidos para estandarizar la citometría de flujo de la vesícula...

Área de la Ciencia:

• Ingeniería Biomédica Ingeniería Biomédica.
• Química Analítica La Química Analítica es un campo de estudio de la química analítica.
• La biofísica es la biofísica.

Sus antecedentes:

• Las vesículas extracelulares (EV) son biomarcadores cruciales que se encuentran en los fluidos corporales.
• La citometría de flujo se utiliza para cuantificar las concentraciones de EV, basándose en la dispersión de la luz.
• El tamaño y la cuantificación precisos dependen de la teoría de Mie, que requiere un índice de refracción (IR) preciso del medio circundante.

Objetivo del estudio:

• Para medir los índices de refracción rastreables (IR) de los líquidos de suspensión comunes utilizados en el análisis de EV.
• Para evaluar el impacto de la precisión de RI en el tamaño de EV y las mediciones de concentración.
• Proporcionar recomendaciones para mejorar la precisión de la citometría de flujo EV.

Principales métodos:

• Medición trazable de IR para la solución salina tamponada con fosfato (DPBS) y el plasma sanguíneo humano diluido de Dulbecco.
• Se utilizan longitudes de onda entre 405 y 644 nm con una incertidumbre de $1.4\times {10}^{-5}\$\$\; 1.4\backslash times\; \{10\}^\{-5\}\; \$\$$.
• Las concentraciones comparadas de EV derivadas de los IR asumidos versus los medidos utilizando la teoría de Mie y la citometría de flujo.

Principales resultados:

• Se determinaron con precisión los IR rastreables para el DPBS y las diluciones plasmáticas.
• Las diferencias entre los IR asumidos y los medidos alteraron significativamente las puertas de diámetro óptico y las concentraciones de EV informadas.
• El uso del RI actualmente asumido para DPBS en la calibración de Rosetta dio como resultado discrepancias del 9% al 35% en las concentraciones de EV.

Conclusiones:

• La determinación precisa de RI de los líquidos en suspensión es crítica para una cuantificación confiable de EV.
• Los supuestos actuales de RI en la calibración de la citometría de flujo EV conducen a errores de medición significativos.
• La implementación de RIs medidos de forma trazable en los cálculos de la teoría de Mie mejorará la precisión del diámetro óptico EV y las mediciones de concentración.