Microscopía de barrido por imagen interferométrica para imágenes sin marcaje con una resolución lateral de 120 nm en...

Área de la Ciencia:

• Ciencias de la Vida
• Microscopía
• Biología Celular

Sus antecedentes:

• La microscopía de fluorescencia convencional enfrenta limitaciones como la fototoxicidad y los problemas de marcaje.
• Las técnicas sin marcaje, como la microscopía de dispersión interferométrica (iSCAT), detectan estructuras a nanoescala sin tintes.
• La iSCAT confocal ha permitido la obtención de imágenes subcelulares en células vivas con alto contraste.

Objetivo del estudio:

• Introducir la microscopía de barrido por imagen interferométrica (iISM) como una técnica de obtención de imágenes de células vivas de próxima generación.
• Lograr la obtención de imágenes de alta resolución y bajo impacto de la dinámica intracelular.
• Permitir la correlación de información estructural sin marcaje con especificidad molecular.

Principales métodos:

• Combinación de la detección interferométrica con la microscopía de barrido por imagen.
• Se logró una resolución lateral de aproximadamente 120 nm.
• Operación a una potencia de iluminación diez veces menor por punto limitado por difracción en comparación con métodos anteriores.

Principales resultados:

• Daño fotoquímico significativamente reducido al tiempo que se mejora la relación señal/ruido y el contraste.
• Visualización de orgánulos intracelulares (retículo endoplasmático, citoesqueleto, mitocondrias, vesículas) en células vivas.
• Permitió tiempos de observación esencialmente ilimitados para la obtención de imágenes de células vivas.

Conclusiones:

• La iISM proporciona una nueva y potente herramienta para la obtención de imágenes de células vivas de alta resolución y bajo impacto.
• Facilita el estudio de procesos biológicos dinámicos en condiciones sin marcaje y casi nativas.
• Abre nuevas vías para la comprensión biológica de las interacciones huésped-patógeno, el tráfico y la dinámica del citoesqueleto.