Triplex de ADNzyme-guía de aptámero optimizado en terminal que potencia la detección multiplex de patógenos...

Área de la Ciencia:

• Biotecnología
• Ciencia de los Alimentos
• Biología Molecular

Sus antecedentes:

• La detección multiplex y sensible de patógenos transmitidos por alimentos es crucial para el control de enfermedades.
• La Argonaute mesófila de Clostridium butyricum (CbAgo) tiene actividad endonucleasa para la escisión precisa dirigida por ADN, útil para la detección de patógenos.
• Las limitaciones de la actividad de CbAgo pueden superarse mediante gDNA modificado y mecanismos enzimáticos sinérgicos.

Objetivo del estudio:

• Ingeniería del gDNA de CbAgo con un fragmento funcionalizado con ADNzyme (ADNc) para mejorar la actividad de escisión.
• Investigar la integración sinérgica de las actividades de ADNzyme y CbAgo para mejorar la amplificación de la señal.
• Desarrollar un biosensor multiplex para la detección simultánea de bacterias patógenas transmitidas por alimentos.

Principales métodos:

• gDNA modificado mediante la incorporación de un fragmento funcionalizado con ADNzyme (ADNc) para la escisión del sustrato.
• Investigación de las preferencias del grupo de modificación terminal para la interacción óptima ADNzyme-CbAgo.
• Desarrollo de un biosensor de aptámeros de fluorescencia sinérgica ADNzyme-CbAgo.

Principales resultados:

• El CbAgo modificado con ADNc demostró una actividad de escisión cooperativa mejorada.
• La integración sinérgica de las actividades enzimáticas duales mejoró significativamente la amplificación de la señal.
• El biosensor desarrollado logró la detección multiplex de tres bacterias patógenas con un límite de detección bajo (69 UFC mL⁻¹).

Conclusiones:

• El sistema sinérgico ADNzyme-CbAgo ofrece una eficiencia mejorada para la detección de patógenos.
• El biosensor de aptámeros desarrollado permite la detección simultánea de múltiples patógenos transmitidos por alimentos.
• Esta plataforma proporciona un método potencial para la detección de patógenos transmitidos por alimentos sin extracción y amplificación de ADN.