Un método HPLC validado para la evaluación de la actividad de la calicreína y su uso en la evaluación de extractos de...

Área de la Ciencia:

• Bioquímica
• Química Analítica
• Farmacología

Sus antecedentes:

• Los ensayos espectrofotométricos convencionales para la actividad de la calicreína (KLK) son susceptibles a interferencias espectrales en matrices biológicas complejas.
• Las limitaciones de los métodos existentes exigen el desarrollo de técnicas analíticas más robustas y precisas para la evaluación de la actividad de KLK.

Objetivo del estudio:

• Establecer y validar un método de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) para la cuantificación precisa de la actividad de KLK.
• Superar las limitaciones de la espectrofotometría UV-Vis desarrollando un método libre de interferencias espectrales.
• Evaluar varios extractos de frutas para sus efectos moduladores de calicreína (KLK) utilizando el método HPLC validado.

Principales métodos:

• Desarrollo de un método HPLC para la separación y cuantificación de N-benzoil-L-arginina etil éster (BAEE) y su producto N-benzoil-L-arginina (BA).
• Validación del método HPLC para linealidad, precisión, exactitud y límite de detección (LOD).
• Aplicación del método HPLC validado para analizar la actividad de KLK en extractos de frutas acuosos, etanólicos e hidrolizados con pepsina.

Principales resultados:

• El método HPLC logró la separación completa de BAEE y BA con alta precisión y exactitud (recuperación media: 100,9%).
• El método demostró un bajo límite de detección (LOD) para BA (0,25 mg/L).
• El análisis de extractos de frutas reveló efectos moduladores diferenciales de KLK: los extractos etanólicos generalmente activaron KLK, los extractos acuosos lo inhibieron y los hidrolizados de pepsina mostraron efectos potentes y variados.

Conclusiones:

• El método HPLC desarrollado es una herramienta fiable y precisa para evaluar la actividad de KLK en muestras complejas, superando las limitaciones de los ensayos espectrofotométricos.
• Se identificaron extractos de frutas específicos, en particular hidrolizados de pepsina, como fuentes potentes de nuevos moduladores de calicreína (KLK).
• Los hallazgos resaltan el potencial de los compuestos derivados de frutas como moduladores de la actividad de KLK para aplicaciones terapéuticas.