Cuantificación mediante LC-MS/MS de óxido de trimetilamina N en plasma y micromuestras de absorción volumétrica:...

El óxido de trimetilamina (TMAO) es un metabolito relacionado con el microbioma intestinal que podría estar asociado con lesión renal y riesgo cardiovascular. La medición de TMAO en niños después del trasplante renal podría apoyar la investigación sobre el eje intestino-riñón-cardiovascular; sin embargo, el muestreo venoso repetido suele ser poco práctico en estudios pediátricos longitudinales. Este estudio tuvo como objetivo validar un método rápido mediante LC-MS/MS para medir TMAO en muestras de plasma y 10 μL de sangre capilar seca recolectadas mediante microtoma absorbente volumétrica (VAMS). TMAO se cuantificó utilizando su estándar interno marcado con isótopo estable, TMAO-d₉, mediante cromatografía de interacción por hidrofilicidad (HILIC) con ionización por electrospray en modo positivo. Para el TMAO, un analito endógeno, se determinaron curvas de calibración utilizando una matriz sustituta de albúmina sérica bovina al 5 % en solución salina tamponada con fosfato (PBS) para plasma y una matriz sustituta de sangre total para VAMS. Las muestras de control de calidad se prepararon en matrices auténticas. El proceso de validación incluyó el análisis de la curva de calibración, el LLOQ, la exactitud, la precisión, la recuperación, el efecto de matriz, la estabilidad, el reanálisis de muestras obtenidas, el paralelismo de matriz y la comparabilidad de los resultados entre plasma y VAMS. La curva de calibración del ensayo fue lineal entre 0,1 y 20 μmol/L. El LLOQ fue de 0,1 μmol/L para ambas matrices. El valor medio de R de calibración²los valores fueron 0,9989 ± 0,0007 para el plasma y 0,9981 ± 0,0011 para VAMS. Las matrices sustituta y verdadera mostraron un paralelismo similar (pendientes de 0,97 y 0,93 para plasma y VAMS, respectivamente). En la población pediátrica de trasplante renal, el TMAO en plasma se correlacionó altamente con la creatinina sérica (r = 0,964) y se correlacionó inversamente con el TFG (r = -0,788). Se observaron asociaciones similares entre el TMAO estimado en plasma VAMS y la creatinina (r = 0,951) y el TFG (r = -0,784). El método validado permite la cuantificación confiable de TMAO en micromuestras tanto de plasma como de VAMS y demuestra la viabilidad analítica para futuros estudios longitudinales de biomarcadores en el trasplante renal pediátrico. Sin embargo, estos hallazgos clínicos deben considerarse exploratorios y no como evidencia de utilidad clínica.