Aislamiento y transformación de células mesenquimales primarias del embrión de pollo

Área de la Ciencia:

• Biología del desarrollo Biología del desarrollo.
• Biología Molecular Biología Molecular
• Biología celular Biología celular.

Sus antecedentes:

• Las células mesenquimales primarias puras de embriones de pollo poseen un potencial de diferenciación multipotente.
• El virus de la eritroblastosis aviar (AEV) puede transformar estas células mesenquimales in vitro.

Objetivo del estudio:

• Para investigar el potencial de diferenciación de las células mesenquimales transformadas por AEV.
• Para analizar la síntesis de globina y su regulación en células transformadas.
• Explorar el uso de mutantes sensibles a la temperatura para inducir la diferenciación.

Principales métodos:

• Aislamiento y cultivo de células mesenquimales primarias puras de embriones de pollo.
• Transformación in vitro utilizando virus de la eritroblastosis aviar de tipo salvaje (wt-AEV) y virus de la eritroblastosis aviar sensibles a la temperatura (ts34-AEV).
• Análisis de la proliferación celular, los marcadores de diferenciación (coloración de benzidina, inmunofluorescencia), la síntesis de la cadena de globina (electroforesis en gel, inmunoprecipitación), y el efecto del n-butirato y los cambios de temperatura.

Principales resultados:

• Las células mesenquimales transformadas (células MAE) proliferaron rápidamente y se mantuvieron en gran medida indiferenciadas.
• Las células MAE sintetizaron alfa D, pi (o pi) y otras cadenas de globinas.
• El tratamiento con n-butirato inhibió reversiblemente la proliferación y aumentó la síntesis de globina.
• Las células transformadas ts34-AEV sensibles a la temperatura (MAE-ts34) mostraron positividad inducida a la benzidina (diferenciación eritroide) al cambio de temperatura de 37°C a 41°C.
• La expresión de globina e histona H5 varió entre los clones, con cadenas alfa A y alfa D sintetizadas en las células MAE-ts34.

Conclusiones:

• Las células mesenquimales transformadas por AEV proporcionan un modelo para el estudio de la diferenciación eritroide.
• La síntesis de globina se produce en las células transformadas, y su regulación puede ser modulada por tratamientos químicos y de temperatura.
• Los mutantes sensibles a la temperatura ofrecen una herramienta para inducir la diferenciación de manera controlada, aunque esta capacidad disminuye con la edad del clon.