Las estructuras Lariat son intermedios in vivo en el empalme del pre-ARNm de la levadura

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Genética de la levadura Genética de la levadura
• El Splicing de ARN y ARN.

Sus antecedentes:

• El gen de actina en la levadura contiene un intrón crucial para la expresión génica.
• Se ha observado un empalme eficiente in vivo del intrón de actina de una fusión de genes de ADC1-actina.
• Comprender el procesamiento y la estructura de los intrones es vital para los estudios de regulación génica.

Objetivo del estudio:

• Caracterizar las formas y estructuras de los intrones de actina cortados en la levadura.
• Para investigar el papel de la secuencia UACUAAC (caja TACTAAC) conservada en el procesamiento de intrones.
• Para determinar los enlaces químicos específicos dentro del ARN intrónico extirpado.

Principales métodos:

• Análisis de las fracciones de ARN poli (A) - y poli (A) + de levadura.
• Electroforesis en gel de poliacrilamida para evaluar el tamaño y la movilidad del ARN.
• Pruebas de transcripción inversa para identificar bloqueos en el procesamiento del ARN.
• Etiquetado in vivo de 32P y análisis de la estructura de ARN intronico extirpado.

Principales resultados:

• Se identificaron cuatro formas distintas de ARN intrónico de actina extirpado.
• Dos formas de intrones extirpadas exhibieron una migración anormal en los geles.
• Una secuencia UACUAAC conservada (caja TACTAAC) mostró un bloqueo de la transcriptasa inversa en algunas especies.
• La principal especie de intrón extirpado fue identificada como un ARN lariat con un enlace fosfodiéster de 2'-5'.

Conclusiones:

• Las levaduras procesan y eliminan eficientemente los intrones de actina in vivo.
• Los intrones de actina extirpados pueden formar estructuras lariat estables.
• La caja TACTAAC está involucrada en el mecanismo de empalme y puede conducir a estructuras específicas de ARN.