Acidificación rápida de las vesículas endocíticas que contienen alfa 2-macroglobulina

Área de la Ciencia:

• Biología celular Biología celular.
• La bioquímica es la bioquímica.

Sus antecedentes:

• La endocitosis mediada por receptores es un proceso celular clave para la internalización de los ligandos.
• Comprender los cambios dinámicos de pH dentro de las vesículas endocíticas es crucial para dilucidar las vías de tráfico celular.

Objetivo del estudio:

• Para cuantificar los cambios de pH en el microambiente de los ligandos internalizados durante la endocitosis mediada por receptores.
• Para determinar el pH de las vesículas endocíticas antes de la fusión lisosomal.

Principales métodos:

• Utilizó alfa 2-macroglobulina (F-alfa 2M) marcada con fluoresceína como indicador del pH.
• Se empleó espectroscopía de microscopio para medir las intensidades de fluorescencia en fibroblastos de ratón BALB/c 3T3 únicos.
• pH determinado a partir de la relación de las intensidades de fluorescencia de la fluoresceína en longitudes de onda de excitación específicas (450 nm y 490 nm).
• Localización endosómica validada utilizando alfa 2M marcado con oro coloidal y microscopía electrónica.

Principales resultados:

• El pH del microambiente F-alfa 2M en las vesículas endocíticas se midió en 5.0 +/- 0.2.2.
• La microscopía electrónica confirmó la localización alfa 2M en vesículas no recubiertas negativas para la fosfatasa ácida.
• El pH lisosómico se determinó en 4.6 +/- 0.2 utilizando fluoresceína dextrano.

Conclusiones:

• Las vesículas endocíticas exhiben un pH ácido de aproximadamente 5.0.
• Esta acidificación ocurre antes de que las vesículas se fusionen con los lisosomas.
• Estos hallazgos proporcionan información sobre las primeras etapas de la vía endocítica y la biogénesis lisosomal.