La clonación molecular de secuencias de un locus de ARN polimerasa II de Drosophila mediante el etiquetado de...

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Genética La genética.
• Biología del desarrollo Biología del desarrollo.

Sus antecedentes:

• El locus de la ARN polimerasa II (RpIIC4) en Drosophila melanogaster es esencial para la transcripción génica.
• Los elementos transponibles, como el elemento P, pueden causar mutaciones al insertarse en los genes.
• La disgenesis híbrida es un fenómeno en Drosophila asociado con la actividad del elemento P.

Objetivo del estudio:

• Para identificar la causa genética de una mutación letal en el locus II de la ARN polimerasa II de Drosophila.
• Desarrollar un nuevo método para clonar loci genéticamente definidos utilizando inserciones de elementos P.

Principales métodos:

• Aislamiento de un clon de fago lambda que contiene inserción de elemento P y ADN genómico flanqueante del locus RpII.
• Hibridación de secuencias de elementos P para identificar las regiones de inserción y de flanqueo.
• Análisis de cromosomas de politeno para determinar la ubicación citogenética de la mutación.
• Generación de nuevas inserciones de elementos P y análisis de revertentes.

Principales resultados:

• Se identificó una mutación letal en el locus RpIIC4 y se relacionó con la inserción del elemento P.
• Se encontró una inserción de elemento P de 1,3 kb dentro de un fragmento de ADN genómico de 10 kb del locus RpII.
• Las secuencias no P se hibridaron a la banda 10C del cromosoma politeno, la ubicación conocida de RpIIC4.4.
• Los revertentes de la mutación letal también mostraron pérdida de secuencias de elementos P en el locus.
• Se identificaron múltiples sitios de inserción de elementos P dentro del locus.

Conclusiones:

• La inserción del elemento P es una causa de mutaciones letales en el locus II de la ARN polimerasa II de Drosophila.
• La clonación de loci genéticamente definidos en Drosophila puede lograrse mediante la mutagenesis del elemento P y la recuperación de secuencias de ADN flanqueantes.
• Este método proporciona una poderosa herramienta para la clonación de genes y el análisis genético en Drosophila.