Purificación de una ADN polimerasa codificada por adenovirus que se requiere para iniciar la replicación del ADN

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Virología Virología.
• Genética La genética.

Sus antecedentes:

• Los mutantes sensibles a la temperatura del adenovirus humano tipo 5 (Ad5) exhiben defectos en la replicación del ADN viral y la transformación celular a temperaturas no permisivas.
• Los extractos nucleares de las células infectadas por Ad5ts149 no logran replicar el ADN viral in vitro a la temperatura no permisiva.

Objetivo del estudio:

• Para investigar la base molecular del defecto en la replicación y transformación del ADN viral.
• Identificar y caracterizar las proteínas virales involucradas en el inicio de la síntesis de ADN del adenovirus.

Principales métodos:

• Utilizados extractos nucleares de células infectadas para ensayos de replicación de ADN in vitro.
• Purificó una proteína complementaria con actividad de la ADN polimerasa a partir de extractos de células HeLa infectadas.
• Analizó la asociación de proteínas purificadas dentro de un complejo de replicación.

Principales resultados:

• Se identificó un defecto en el paso inicial de la síntesis del ADN viral: el enlace covalente del precursor de la proteína terminal (pTP) y dCMP.
• Purificó una proteína de 140 kilodalton (kd) con actividad de ADN polimerasa que complementa los extractos defectuosos.
• Esta proteína de 140 kd está estrechamente asociada con la pTP de 80 kd en un complejo de replicación, ambas codificadas por la región E2B del adenovirus.

Conclusiones:

• El adenovirus codifica una nueva ADN polimerasa esencial para el primado de la síntesis de ADN viral en el origen de la replicación.
• Esta polimerasa de ADN viral es un componente clave de la maquinaria de replicación del adenovirus.
• La ADN polimerasa identificada también puede desempeñar un papel en el inicio de la transformación celular inducida por adenovirus.