Los genomas de los retrovirus metilados por la metilasa de los mamíferos pero no por la metilasa bacteriana no son...

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• La epigenética es la epigenética.
• Regulación genética Reglamento genético.

Sus antecedentes:

• El papel de la metilación del ADN en la expresión génica eucariota es cada vez más reconocido.
• Estudios anteriores sugirieron un vínculo entre la metilación y la expresión génica, pero no identificaron residuos específicos.
• Las metilasas de ADN bacteriano específicas de la secuencia han mostrado efectos variables en la expresión génica.

Objetivo del estudio:

• Para investigar el impacto de la metilación del ADN en la expresión génica independiente de la especificidad de la secuencia.
• Para determinar si la metilación en dinucleótidos C-G no específicos afecta la actividad biológica.

Principales métodos:

• Metilación in vitro de todos los dinucleótidos C-G en un clon genómico proviral del virus de la leucemia murina de Moloney (M-MuLV) utilizando una enzima hepática de rata.
• Prueba de transfección para medir la actividad biológica (infectividad) del ADN M-MuLV metilado.
• Comparación de los efectos de la metilación utilizando una enzima hepática de rata no específica de la secuencia frente a la metilación en sitios específicos de HpaII.
• Reversión de la inactivación inducida por metilación mediante el tratamiento con 5-azacitidina en células receptoras.

Principales resultados:

• La metilación de todos los dinucleótidos C-G en el ADN M-MuLV por la enzima hepática de rata redujo la actividad biológica viral en más de tres órdenes de magnitud.
• La metilación completa de 35 sitios HpaII en el mismo ADN tuvo un efecto insignificante en la actividad biológica.
• La inactivación causada por la metilasa de la rata fue reversible con la 5-azacitidina, restaurando la actividad biológica de los genomas virales.

Conclusiones:

• La metilación del ADN en los dinucleótidos C-G, más allá de los reconocidos por las enzimas de restricción, juega un papel crítico en la expresión génica.
• La metilación no específica de la secuencia tiene un impacto significativo en la actividad biológica de los genomas virales.
• La reversibilidad del silenciamiento inducido por la metilación sugiere un mecanismo de regulación epigenético dinámico.