Viabilidad de los fagos lambda portadores de un palíndromo perfecto en ausencia de nucleasas de recombinación

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Genética La genética.
• Microbiología Microbiología.

Sus antecedentes:

• Los palíndromos perfectos que excedan de 30 pares de bases (bp) son típicamente inestables en Escherichia coli.
• Esta inestabilidad se debe probablemente a la formación de estructuras cruciformes, favorecidas por el superenrollamiento negativo.
• Las hipótesis anteriores sugirieron una interferencia cruciforme con la replicación o la actividad de la polimerasa.

Objetivo del estudio:

• Para investigar la causa de la inestabilidad en grandes palíndromos perfectos dentro de los fagos lambda.
• Para probar la hipótesis de que la escisión nucleolítica de las estructuras cruciformes contribuye a la inviabilidad.

Principales métodos:

• Construyó un derivado de fag lambda que llevaba un gran palíndromo perfecto (1.600 bp de repetición invertida).
• Generó un mutante que carece de las nucleasas de recombinación recBC (exonucleasa V) y sbcB (exonucleasa I).
• Evaluó la viabilidad del fago modificado lambda.

Principales resultados:

• La ausencia simultánea de la exonucleasa V y la exonucleasa I confirió viabilidad al fago lambda con un gran palíndromo perfecto.
• Este hallazgo apoya una nueva hipótesis con respecto a la inestabilidad del palíndromo.

Conclusiones:

• La escisión nucleolítica de estructuras cruciformes, potencialmente por enzimas como la T4 exonucleasa VII, es una causa probable de inviabilidad para réplicas con grandes palíndromos perfectos.
• La manipulación genética de las nucleasas de recombinación puede restaurar la viabilidad de tales construcciones.