Evolución in vitro de nuevos ribozimas con actividad de la kinasa de polinucleótidos

Área de la Ciencia:

• La bioquímica es la bioquímica.
• Biología Molecular Biología Molecular
• La catálisis del ARN.

Sus antecedentes:

• Las ribozimas son moléculas de ARN con actividad catalítica.
• Las quinasas de polinucleótidos son enzimas que modifican los ácidos nucleicos, a menudo utilizando ATP.
• ATP-gamma S es un análogo no hidrolizable del ATP utilizado en estudios bioquímicos.

Objetivo del estudio:

• Para aislar y caracterizar los nuevos ribozimas de la polinucleotida quinasa.
• Para investigar los mecanismos catalíticos de las diferentes clases de ribozimas de la quinasa.
• Para diseñar una ribozima capaz de una eficiente fosforilación del ARN.

Principales métodos:

• Selección in vitro (SELEX) para aislar ribozimas de un grupo de secuencias aleatorias.
• Ensayos bioquímicos para probar la actividad de la quinasa utilizando ATP-gamma S.
• Experimentos de rotación enzimática para evaluar la eficiencia catalítica.

Principales resultados:

• Aislamiento de diversos ribozimas de la cinasa de polinucleótidos con diferentes especificidades del sustrato.
• Identificación de las ribozimas que catalizan la transferencia de tiofosfato a los grupos 5'-hidroxilo y 2'-hidroxilo interno.
• Ingeniería de una clase específica de ribozimas para lograr la fosforilación de recambio múltiple de un sustrato de oligoribonucleótido exógeno.

Conclusiones:

• Se han descubierto nuevos ribozimas con actividad de la kinasa polinucleótida.
• Los ribozimas diseñados pueden funcionar como verdaderas enzimas para la modificación del ARN.
• Este trabajo amplía el repertorio de catalizadores basados en ARN para aplicaciones bioquímicas.