Escisión endonucleolítica específica de la estructura de los ácidos nucleicos por las polimerasas de ADN eubacteriano

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Enzimología Enzimología.
• Química del ácido nucleico Química del ácido nucleico

Sus antecedentes:

• Exonucleasas 5' previamente identificadas en las polimerasas de ADN eubacteriano.
• Se pensaba que estas enzimas funcionaban principalmente en la reparación o procesamiento del ADN.

Objetivo del estudio:

• Para caracterizar la especificidad del sustrato y el mecanismo de acción de estas 5' exonucleasas.
• Para determinar si estas enzimas exhiben actividad endonucleasa y bajo qué condiciones.

Principales métodos:

• Los ensayos enzimáticos utilizan varios sustratos de ADN y ARN con estructuras definidas.
• Análisis cinético de las reacciones de escisión.
• Investigando el papel de los primers y la hibridación en la actividad enzimática.

Principales resultados:

• Se demostró que las exonucleasas 5' son endonucleasas específicas de la estructura que dividen el ADN/ARN monocatenario en bifurcaciones dúplex.
• La escisión no está acoplada a la síntesis de ADN, pero es significativamente acelerada por los primers.
• Las enzimas acceden a los sitios de escisión moviéndose a lo largo de la cadena de ácido nucleico.
• Se pueden dividir hasta 200 brazos de cadena única de nucleótidos.
• La escisión dirigida de cualquier ácido nucleico lineal monocatenario se puede lograr a través de la hibridación con un oligonucleótido complementario.

Conclusiones:

• Las exonucleasas 5' de las polimerasas de ADN eubacteriano poseen una nueva actividad endonucleasa.
• Esta actividad se puede aprovechar para la escisión de ácido nucleico dirigida mediante el diseño de sondas de hibridación específicas.
• Ofrece una nueva herramienta para aplicaciones de biología molecular que requieren una degradación precisa del ácido nucleico.