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Un tercer elemento de reconocimiento en los promotores bacterianos: la unión al ADN por la subunidad alfa de la ARN
W Ross1, K K Gosink, J Salomon
1Department of Bacteriology, University of Wisconsin-Madison 53706.
Science (New York, N.Y.)
|November 26, 1993
Resumen
El elemento UP, una secuencia de ADN rica en AT, aumenta significativamente la transcripción bacteriana al interactuar directamente con la subunidad alfa de la ARN polimerasa. Esta interacción es crucial para el reconocimiento del promotor más allá de las regiones estándar -10 y -35.
Área de la Ciencia:
- Biología Molecular Biología Molecular
- Genética La genética.
- La bioquímica es la bioquímica.
Sus antecedentes:
- El promotor rrnB P1 en Escherichia coli contiene un elemento de activación (UP) aguas arriba.
- Esta secuencia de ADN rica en AT mejora la iniciación de la transcripción por la ARN polimerasa.
Objetivo del estudio:
- Investigar el mecanismo por el cual el elemento UP estimula la transcripción.
- Para identificar el componente específico de la ARN polimerasa responsable de la interacción del elemento UP.
Principales métodos:
- Mutagénesis dirigida al sitio de la subunidad alfa de la ARN polimerasa.
- Pruebas de transcripción in vitro e in vivo.
- Los experimentos de huellas de ADNase I.
- Ensayos de desplazamiento de movilidad electroforética (EMSA) para estudiar las interacciones proteína-ADN.
Principales resultados:
- Las mutaciones en la región C-terminal de la subunidad alfa abolieron la estimulación de la transcripción dependiente del elemento UP.
- La ARN polimerasa mutante mostró una unión reducida al elemento UP en ensayos de huella.
- La subunidad alfa purificada se une directamente al elemento UP, confirmando su papel en el reconocimiento.
Conclusiones:
- El elemento UP representa un tercer sitio de reconocimiento de promotores, que interactúa con la subunidad alfa de la ARN polimerasa.
- Esta interacción es distinta de la interacción de la subunidad sigma con las regiones -10 y -35.
- Los elementos UP pueden explicar la prevalencia de secuencias ricas en AT aguas arriba de los promotores procarióticos y sugieren un vínculo entre la función del elemento UP y la activación del factor de transcripción.