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Represión mitótica de la transcripción de la ARN polimerasa III in vitro mediada por la fosforilación de un
J M Gottesfeld1, V J Wolf, T Dang
1Department of Molecular Biology, Scripps Research Institute, La Jolla, CA 92037.
Science (New York, N.Y.)
|January 7, 1994
Resumen
Las proteínacinasas mitóticas, activadas por la ciclina B, reprimen la transcripción de la ARN polimerasa III en extractos de huevo de Xenopus. Esta represión se produce a través de la fosforilación directa del factor de iniciación de la transcripción TFIIIB.
Área de la Ciencia:
- Biología Molecular Biología Molecular
- Regulación del ciclo celular Reglamento del ciclo celular.
- Transcripción genética de la transcripción de genes.
Sus antecedentes:
- Los extractos de huevo de Xenopus laevis apoyan la transcripción de la ARN polimerasa III (Pol III) durante la interfase.
- Las transiciones del ciclo celular implican quinasas reguladoras que pueden afectar la transcripción.
Objetivo del estudio:
- Investigar el mecanismo por el cual las cinasas mitóticas reprimen la transcripción de Pol III.
- Para identificar el componente específico de la maquinaria de transcripción Pol III dirigida por la represión mitótica.
Principales métodos:
- Utilizado Xenopus laevis extractos de citosol de interfase para ensayos de transcripción.
- Se emplea ciclina B1 recombinante para activar las kinasas mitóticas.
- Utilizó kinasa p34cdc2-ciclina B purificada por afinidad (factor promotor de la mitosis) en sistemas de transcripción simplificados.
- Investigó el estado de fosforilación de los factores de transcripción utilizando ensayos in vitro.
Principales resultados:
- La adición de ciclina B1 activó las cinasas mitóticas, lo que condujo a la represión de la transcripción de Pol III.
- El factor promotor de la mitosis (p34cdc2-ciclina B quinasa) fue suficiente para causar esta represión.
- La represión mitótica implica directamente la fosforilación de un componente dentro del factor de iniciación TFIIIB, que incluye la proteína de unión a la caja TATA (TBP).
- La actividad transcripcional de la fracción TFIIIB-TBP fue modulada por la fosforilación de la kinasa mitótica y la desfosforilación de la fosfatasa alcalina.
Conclusiones:
- Las quinasas mitóticas, particularmente la p34cdc2-ciclina B, juegan un papel directo en la represión de la transcripción de la ARN polimerasa III.
- La fosforilación de TFIIIB por las cinasas mitóticas es un mecanismo clave para regular la transcripción de Pol III durante el ciclo celular.
- TFIIIB es un objetivo directo para la regulación dependiente del ciclo celular de la transcripción de Pol III.