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Los radicales tiilo en las reductasas de ribonucleótidos
S Licht1, G J Gerfen, J Stubbe
1Department of Chemistry, Massachusetts Institute of Technology, Cambridge 02139, USA.
Science (New York, N.Y.)
|January 26, 1996
Resumen
Lactobacillus leichmannii ribonucleoside triphosphate reductase (RTPR) utiliza un radical tiilo intermedio para la reducción de nucleótidos y el intercambio de hidrógeno. Este mecanismo radical es similar al de la ribonucleótido reductasa de Escherichia coli.
Área de la Ciencia:
- La bioquímica es la bioquímica.
- Enzimología Enzimología.
- Biología Molecular Biología Molecular
Sus antecedentes:
- La ribonucleósido trifosfato reductasa (RTPR) de Lactobacillus leichmannii es crucial para la reducción de nucleótidos.
- La adenosilcobalamina (AdoCbl) es un cofactor clave en las reacciones catalizadas por RTPR.
- Se ha propuesto un radical tiilo a base de proteínas como intermediario catalítico.
Objetivo del estudio:
- Para investigar el radical tiilo intermedio propuesto en la catálisis de RTPR.
- Aclarar el mecanismo de reducción de nucleótidos y intercambio de hidrógeno dependientes de AdoCbl.
- Para comparar el mecanismo catalítico de Lactobacillus leichmannii RTPR con otras ribonucleótidos reductasas.
Principales métodos:
- Se utilizaron técnicas de congelación rápida para atrapar los intermediarios de la reacción.
- Se empleó la espectroscopia de resonancia paramagnética de electrones (EPR) para analizar las especies radicales.
- Incorporó residuos de cisteína específicamente deuterados para sondear la estructura del intermediario.
- Aplicó técnicas de apagado rápido con ácido para detectar otros productos intermedios propuestos.
Principales resultados:
- Los espectros EPR de los intermediarios atrapados mostraron características hiperfinas estrechadas con RTPR deuterado, lo que indica un radical tiilo acoplado a la cob(II) alamina.
- 5'-deoxyadenosine fue identificado como otro intermediario de reacción.
- Los hallazgos apoyan la participación de un radical tilio tanto en la reducción de nucleótidos como en las reacciones de intercambio de hidrógeno.
Conclusiones:
- El estudio proporciona pruebas sólidas de un radical tiilo intermedio basado en proteínas en Lactobacillus leichmannii RTPR.
- El mecanismo de Lactobacillus leichmannii RTPR comparte similitudes con la ribonucleótido reductasa de Escherichia coli, lo que sugiere una estrategia catalítica conservada que involucra radicales tiilo.