La actividad de la desoxicitidiltransferasa de la proteína REV1 de la levadura

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular Biología Molecular
• Genética La genética.
• La bioquímica es la bioquímica.

Sus antecedentes:

• La mutagenesis del daño del ADN en Saccharomyces cerevisiae se basa en los genes REV1, REV3 y REV7.
• Rev3 y Rev7 son subunidades de la ADN polimerasa-zeta (Pol-zeta), esenciales para la síntesis de la traslación.
• Rev1 comparte homología con el UmuC de E. coli, involucrado en la síntesis de la transleción a través de un mecanismo poco claro.

Objetivo del estudio:

• Para investigar la actividad enzimática de la proteína Rev1.
• Para aclarar el papel de Rev1 en la tolerancia al daño del ADN y la mutagénesis.
• Comprender la interacción entre Rev1 y Pol-zeta en las vías de reparación del ADN.

Principales métodos:

• Evaluación de la actividad de la desoxicitidiltransferasa de la proteína Rev1 purificada in vitro.
• Utilizando ensayos de extensión de primeras de ADN dependientes de la plantilla.
• Caracterización de la eficiencia de extensión del primer por diferentes polimerasas de ADN (Pol-zeta y Pol-alfa).

Principales resultados:

• La proteína Rev1 cataliza la transferencia dependiente de la plantilla de un residuo de desoxicitidina monofosfato (dCMP) de dCTP al extremo 3' de un primer de ADN.
• La inserción eficiente de dCMP se produjo frente a los sitios básicos de la plantilla.
• La inserción significativa, aunque menor, ocurrió frente a las bases de guanina, adenina y uracilo de la plantilla.
• La inserción de citosina opuesta a los sitios básicos creó un primer terminus extendido eficientemente por Pol-zeta, pero no por la levadura Pol-alfa.

Conclusiones:

• Rev1 posee una nueva actividad de la desoxicitidil transferasa crucial para la mutagenesis del daño en el ADN.
• Esta actividad facilita la inserción de citosina en los sitios abásicos opuestos, lo que permite una posterior extensión por Pol-zeta.
• La función de Rev1 es parte integral de la vía de síntesis de la traslación, particularmente en eludir las lesiones del ADN.