La reparación mediada por transcriptasa inversa mediada por retrotransposón de las rupturas cromosómicas

Área de la Ciencia:

• Genética La genética.
• Biología Molecular Biología Molecular
• La genómica es la genómica.

Sus antecedentes:

• Los elementos nucleares intercalados cortos y largos (SINEs y LINEs) y los pseudogenes son abundantes en los genomas eucariotas.
• Los fenómenos mediados por la transcriptasa inversa (RT) juegan un papel importante en la evolución del genoma.
• Los mecanismos que impulsan la propagación de estos elementos y su vínculo con la reparación del ADN siguen siendo en gran medida desconocidos.

Objetivo del estudio:

• Investigar si los eventos mediados por RT están involucrados en la reparación de roturas de doble cadena (DSB).
• Establecer un sistema de selección en Saccharomyces cerevisiae para estudiar el vínculo entre los DSB y la actividad de RT.
• Para dilucidar los mecanismos por los cuales los ADN complementarios (ADNc) se insertan en los sitios de ruptura.

Principales métodos:

• Desarrollo de un sistema de selección en la levadura (Saccharomyces cerevisiae).
• Inducción de un DSB específico en el locus de tipo de apareamiento (MAT) utilizando endonucleasa HO.
• Análisis de células sobrevivientes en presencia de RT funcional (de L1 humano, levadura Tyl o Crithidia CRE1) y ausencia de recombinación homóloga.
• Secuenciación de las uniones de inserción para determinar los mecanismos de reparación.

Principales resultados:

• Los DSB en la levadura pueden repararse mediante la inserción de ADNc en el sitio de ruptura.
• En ausencia de recombinación homóloga, los cDNA marcados se insertan principalmente en el DSB inducido por la HO endonucleasa.
• Los eventos de inserción ocurren predominantemente a través de la recombinación no homóloga, como lo indican las secuencias de unión.
• La RT funcional de varias fuentes facilita la inserción de ADNc en los DSB.

Conclusiones:

• Es probable que los retroelementos endógenos jueguen un papel en la reparación de las roturas cromosómicas.
• La inserción de cDNA mediada por RT proporciona un mecanismo para la propagación del material genético.
• Este estudio proporciona evidencia experimental que vincula la actividad del retroelemento con las vías de reparación del ADN.