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El reconocimiento del promotor, medido por la unión de la polimerasa a la cadena de oligonucleotido no modelo
1Section of Biochemistry, Molecular and Cell Biology, Biotechnology Building, Cornell University, Ithaca, NY 14853, USA.
Science (New York, N.Y.)
|May 23, 1997
Resumen
Las interacciones específicas proteína-ADN estabilizan el desenrollo del ADN durante la iniciación de la transcripción. La subunidad del factor sigma 70 de la ARN polimerasa entra en contacto con bases de ADN no modelo, y las mutaciones que afectan esta interacción alteran la afinidad de unión.
Área de la Ciencia:
- Biología Molecular Biología Molecular
- Genética La genética.
- La bioquímica es la bioquímica.
Sus antecedentes:
- La iniciación de la transcripción requiere la separación de la cadena de ADN para el acceso de la ARN polimerasa.
- Las interacciones proteína-ADN estabilizan el complejo promotor abierto durante el desenrollamiento.
- La subunidad del factor sigma 70 de la ARN polimerasa es crucial para el reconocimiento del promotor en Escherichia coli.
Objetivo del estudio:
- Para detectar y cuantificar las interacciones específicas entre la ARN polimerasa y el ADN promotor.
- Para investigar el papel de las bases de cadenas de ADN no modelo en la estabilización del complejo promotor.
- Para determinar la contribución de la región 2 conservada del factor sigma 70 a la afinidad de unión del promotor de la ARN polimerasa con el promotor de ARN.
Principales métodos:
- Cuantificación de la afinidad de unión entre la ARN polimerasa y las secuencias de oligonucleótidos no modelo.
- Mutagénesis dirigida al sitio de la región 2 conservada del factor sigma 70.
- Evaluación del impacto de las mutaciones en la función del promotor y la afinidad de unión.
Principales resultados:
- Se detectaron y cuantificaron interacciones de unión específicas entre la ARN polimerasa y el ADN no modelo.
- La región 2 conservada del factor sigma 70 entra directamente en contacto con las bases de las hebras de ADN no modelo.
- Una mutación en la región conservada 2 alteró significativamente la afinidad de unión de la enzima con el oligonucleótido.
Conclusiones:
- Las interacciones específicas proteína-ADN que involucran bases de ADN no modelo son críticas para estabilizar el complejo promotor durante la iniciación de la transcripción.
- La subunidad del factor sigma 70 juega un papel directo en el reconocimiento y la unión a la cadena de ADN no modelo a través de su región 2 conservada.
- Las mutaciones que afectan a estas interacciones tienen consecuencias funcionales para la actividad del promotor y la unión enzima-ADN.