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Estructura de la endonucleasa multimodular FokI unida al ADN
D A Wah1, J A Hirsch, L F Dorner
1Department of Biochemistry and Molecular Biophysics, Columbia University, New York 10032, USA.
Nature
|July 3, 1997
Resumen
La estructura cristalina de la enzima FokI unida al ADN revela su naturaleza bipartita, con distintos dominios de reconocimiento y escisión. Esta estructura sugiere un nuevo mecanismo para la escisión del ADN y permite el diseño de enzimas de ingeniería.
Área de la Ciencia:
- Biología Estructural Biología estructural.
- Biología Molecular Biología Molecular
- Enzimología Enzimología.
Sus antecedentes:
- FokI es una enzima de restricción bipartita con funciones únicas de reconocimiento y escisión del ADN.
- Su capacidad para ser diseñado en enzimas artificiales con nuevas especificidades lo convierte en una herramienta valiosa.
Objetivo del estudio:
- Para determinar la estructura cristalina de la enzima FokI completa unida al ADN con una resolución de 2.8A.
- Para aclarar la base estructural de la función bipartita de FokI y el mecanismo de escisión del ADN.
Principales métodos:
- Cristalografía de rayos X con rayos X.
- Determinación estructural del complejo proteína-ADN.
Principales resultados:
- La estructura cristalina revela distintos dominios amino y carboxiterminales para el reconocimiento y la escisión del ADN.
- El dominio de reconocimiento comparte homología con el dominio de unión al ADN de la proteína CAP, pero está ampliamente modificado.
- El dominio de escisión posee un único centro catalítico y es secuestrado por el dominio de reconocimiento, lo que sugiere un nuevo mecanismo de activación.
Conclusiones:
- La estructura determinada proporciona información sobre un nuevo mecanismo para la activación de la nucleasa.
- Los hallazgos ofrecen un marco para diseñar enzimas quiméricas con especificidades alteradas mediante la comprensión de la relación estructura-función de FokI.