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Fosforilación de Sic1p por G1 Cdk requerida para su degradación y entrada en la fase S
R Verma1, R S Annan, M J Huddleston
1Division of Biology, Box 156-29, California Institute of Technology, Pasadena, CA 91125, USA.
Science (New York, N.Y.)
|October 23, 1997
Resumen
La progresión del ciclo celular de la levadura en ciernes se basa en la cinasa dependiente de ciclina G1 (Cdk) que desencadena la degradación de Sic1p. La fosforilación de Sic1p por G1 Cdk se dirige a la ubiquitinación y destrucción, lo que permite la transición de fase G1/S.
Área de la Ciencia:
- Biología celular Biología celular.
- Biología Molecular Biología Molecular
- La bioquímica es la bioquímica.
Sus antecedentes:
- La transición de la fase G1 a la fase S en la levadura en ciernes es crucial para la progresión del ciclo celular.
- La degradación del inhibidor de la quinasa dependiente de ciclina (Cdk) de la fase S Sic1p es un evento clave regulado por G1 Cdks.
Objetivo del estudio:
- Para investigar el papel de los sitios de fosforilación G1 Cdk en Sic1p.
- Para aclarar el mecanismo por el cual Sic1p se dirige a la degradación.
- Comprender la contribución de la fosforilación y la proteólisis a la transición G1/S.
Principales métodos:
- Se empleó espectrometría de masas multidimensional por electrospray para mapear in vitro e in vivo los sitios de fosforilación G1 Cdk en Sic1p.
- Se analizó un mutante Sic1p que carecía de sitios clave de fosforilación.
- Los ensayos de ubiquitinación se realizaron utilizando fosfoSic1p purificado y extracto G1 empobrecido con ciclina.
Principales resultados:
- Un mutante de Sic1p que carecía de tres sitios de fosforilación de Cdk fue resistente a la ubiquitinación dependiente de Cdc34p in vitro.
- Esta proteína mutante fue estable in vivo y detuvo la replicación del ADN.
- El fosfoSic1p purificado estaba ubiquitinado en el extracto G1 empobrecido con ciclina, destacando el papel de las ciclinas G1.
Conclusiones:
- La fosforilación G1 Cdk de Sic1p es esencial para su ubiquitinación y posterior degradación.
- Los ciclones G1 juegan un papel crítico en la orientación de Sic1p para su destrucción.
- Se propone un modelo molecular en el que la fosforilación y la proteólisis cooperan para regular la transición de fase G1/S en la levadura en ciernes.