La unión y la escisión del ADN por la endonucleasa homing codificada por intrones nucleares I-PpoI I-PpoI

Área de la Ciencia:

• La bioquímica es la bioquímica.
• Biología Estructural Biología estructural.
• Biología Molecular Biología Molecular

Sus antecedentes:

• Las endonucleasas homing son elementos genéticos móviles que se encuentran en intrones e inteínas.
• Reconocen y dividen sitios específicos de ADN objetivo, lo que permite la movilidad de genes / intrones.
• Existen cuatro familias: LAGLIDADG, la caja His-Cys, GIY-YIG y H-N-H.

Objetivo del estudio:

• Para determinar la estructura cristalina de alta resolución de la endonucleasa homing I-PpoI.
• Para aclarar la base estructural de su reconocimiento de ADN y el mecanismo de escisión.
• Para caracterizar el nuevo pliegue unido al zinc y el sitio activo de la enzima.

Principales métodos:

• Cristalografía de rayos X con rayos X.
• Determinación de la estructura del complejo proteína-ADN a una resolución de 1,8 Å.
• Análisis tanto de sustratos como de complejos de productos.

Principales resultados:

• La endonucleasa I-PpoL posee un pliegue alfa/beta alargado y mixto.
• Cada monómero presenta hojas beta antiparalelas, hélices alfa y una cola C-terminal.
• La enzima está estabilizada por dos iones de zinc y exhibe un nuevo sitio activo unido al zinc.
• Se obtuvieron estructuras tanto para complejos de ADN no divididos como para complejos de ADN divididos.

Conclusiones:

• La estructura determinada proporciona información a nivel atómico sobre la función de la endonucleasa homing.
• I-PpoI representa una nueva clase de endonucleasas unidas al zinc.
• Los datos estructurales ayudarán a comprender e ingeniar estos elementos genéticos móviles.