スタウディンガー結合でグリコシルトランスフェラーゼの活性を調べる
Howard C Hang1, Chong Yu, Matthew R Pratt
1Center for New Directions in Organic Synthesis, Departments of Chemistry and Molecular and Cell Biology, and Howard Hughes Medical Institute, University of California, Berkeley, California 94720, USA.
Journal of the American Chemical Society
|January 8, 2004
まとめ
新しいアジド-ELISA測定法により,非自然なアジド糖移転を検出することにより,グリコシルトランスフェラーゼの活性を迅速にスクリーニングすることができます. この方法は,酵素スーパーファミリー分析の汎用的なアプローチを提供することによって,グリコバイオロジーの研究を前進させます.
科学分野:
- グライコバイオロジーは,
- 酵素学 酵素学とは
- 化学生物学 化学生物学とは
背景:
- グリコシルトランスフェラーゼは,グリコバイオロジーの重要な酵素ですが,一般化可能なスクリーニング方法が不足しています.
- 既存のアッセイはしばしば個々の酵素に特異的であり,酵素スーパーファミリー全体の広範な適用を制限しています.
- グリコシルトランスフェラーゼの活性を理解することは,炭水化物に関連する生物学的プロセスに関する研究を進めるための鍵です.
研究 の 目的:
- グリコシルトランスフェラーゼの活性を調べるための新しい,一般化可能な測定法を開発する.
- 酵素の非自然な基板耐性およびアジド化学を分析開発のために活用する.
- 分析をポリペプチドアルファ-N-アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ (ppGalNAcT) 家族に適用する.
主な方法:
- スタウディンガー結合を用いた"アジド-ELISA"アッセイを開発した.
- 非天然の核酸糖ドナーであるUDP-GalNAz (N-アジドアセチルガラクトサミン) を採用した.
- マイクロタイタープレート形式のフォスフィン探知器を使用してアジドの移転を検出し,定量化しました.
主要な成果:
- ポリペプチドアルファ-N-アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ (ppGalNAcT) 家族にアジド-ELISAを成功裏に適用しました.
- ppGalNAcTsがUDP-GalNAzから非自然なGalNAz基板を転送できることを実証しました.
- アジド改変糖でグリコシルトランスファーゼの活性を検出し,定量化するためのアッセイの能力を検証した.
結論:
- アジド-ELISAは,グリコシルトランスフェラーゼ活性に対する多用途かつ迅速なスクリーニング方法を提供します.
- このアプローチは,アジドと酵素基板の乱交性のユニークな反応性を活用します.
- この方法は,さまざまなグリコシルトランスフェラーゼおよびアジド基板に耐性のある他のグループ転送酵素に広く適用できます.
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