T7 RNAポリメラーゼのトランスクリプションは,5位変形UTP誘導体によるものです

科学分野:

• 分子生物学は分子生物学である.
• バイオケミストリー バイオケミストリー
• 合成化学 合成化学とは

背景:

• 無修正ウリジン三リン酸 (UTP) は,RNA合成の基本的な基質である.
• UTPの修正は,その性質とRNAへの組み込みを変化させる可能性があります.
• T7RNAポリメラーゼ (T7RNAP) は,in vitroトランスクリプションで広く使用されている酵素です.

研究 の 目的:

• T7 RNAPトランスクリプションの基質として,アミド結合によって5位で修正された7つのUTP誘導体を評価する.
• これらの改変が転写収量と運動学に与える影響を評価する.
• 改変塩基がRNAの延長を阻害するかどうかを判断する.

主な方法:

• 様々な5位アミド変異を持つ7つのUTP誘導体の合成.
• トランスクリプションアッセイは,T7 RNAPと,様々なDNAテンプレートを持つ改変UTP基板を用いて行われます.
• 変更されたUTPsでT7RNAPのマイケリス定数 (K(m)) と最大速度 (V(max)) を決定するための運動分析.

主要な成果:

• すべての7つのUTP誘導体は,挑戦的なDNAテンプレートでも,十分な量の全長トランスクリプトを生成しました.
• ハイドロフォビック5位変異 (フェニル,ピリジル,インドリル,イソブチル) は,K (m) とV (max) の値が,未修正のUTPに匹敵することを示した.
• 5位におけるイミダゾールとアミノの改変により,K (m) の値が著しく上昇した.
• テストされたすべてのUTP誘導体は,RNAの延長を妨げることなく,トランスクリプトに組み込まれました (類似のV(max)).

結論:

• 排水性5位変異を持つ5つのUTP誘導体は,T7RNAP転写のための効率的な基板である.
• プラスの電荷を持つ5位変異は,酵素の基質親和度要件を高めます.
• UTPの5位変異は,T7RNAPによるRNAトランスクリプトの延長を本質的に阻害しない.